猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体CD163、Sn的克隆及功能鉴定

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猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus, PRRSV)是猪繁殖与呼吸综合症(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS )的病原体。PRRSV主要引起母猪的流产和仔猪的呼吸障碍。从上世纪90年代发现以来,PRRS在全球范围迅速广泛传播,给世界养猪带来了巨大的经济损失。PRRSV在体内主要感染分化良好的巨噬细胞和肺、胸腺、扁桃体、脾、淋巴结等处的巨噬细胞。PRRSV侵染靶细胞的先决条件是与宿主细胞吸附,而宿主细胞表面的受体是完成这种吸附过程必不可少的。研究发现,硫酸乙酰肝素(Heparin Sulphate, HS)、唾液酸粘附素(Sialoadhesin, Sn)和CD163(Cluster of Differentiation 163)分子是PAM上存在的能与PRRSV结合,介导PRRSV侵入PAM细胞、与PRRSV感染相关的三个重要受体分子。为进一步研究CD163和Sn分子在PRRSV感染过程中作用,本研究成功克隆了PRRSV的两个细胞受体CD163分子和Sn,并构建了真核表达载体PIREShyg3.0-CD163和pcDNA3.1-Sn。通过将PIREShyg3.0-CD163和pcDNA3.1-Sn分别瞬时转染PK-15细胞,利用免疫荧光和感染实验研究了CD163分子和Sn在PRRSV感染过程中的作用。结果表明:Sn和CD163都可以介导病毒的内吞进入细胞。瞬时转染Sn或CD163的PK-15细胞系都可以感染PRRSV。研究PRRSV的细胞受体和感染相关分子的特性,有助于从分子水平揭示PRRSV的感染途径及细胞内的复制过程、揭示病毒的致病机制;通过构建稳定表达病毒受体的猪源细胞系,可以获得PRRSV高效增殖的新途径,有助于研制更有效的病毒疫苗和诊断试剂。
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