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目的本课题通过研究助孕3号方对自然流产患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞的影响以及助孕3号方对肾虚黄体抑制流产模型孕鼠外周血T淋巴细胞亚群、蜕膜组织Fas／FasL表达干预的影响，深入探讨自然流产的免疫学发病机制和中药助孕3号方安胎的机理。方法1．临床研究：所有受试病例必须按照诊断标准、纳入标准和排除标准进行筛选，选取早期自然流产脾肾虚型患者30例做为实验组与正常早孕妇女15例做为对照组，检测正常早孕妇女外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+／CD8+及NK细胞百分含量，并比较实验组服用助孕3号方前和服药两周后外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+／CD8+及NK细胞百分含量，进一步探讨助孕3号方治疗自然流产脾肾虚型的作用机理。2．实验研究：以羟基脲+米非司酮建立肾虚黄体抑制病证结合流产模型。随机将46只雌性受孕SD大鼠分为4组：助孕3号方组、黄体酮组、模型组、正常妊娠组，通过检测这四组孕鼠孕第11天外周血中CD3+、CD4+、CD8+、CD4+／CD8+和蜕膜组织Fas和FasL的表达，进一步研究自然流产的发病机制，探讨助孕3号方治疗自然流产的免疫学作用机理。研究结果1．临床研究：实验组在服用助孕3号方前和对照组比较，CD3+变化无显著性差异(P＞0.05)；CD4+、CD4+／CD8+增高，有非常显著性差异(P＜0.01)；CD8+降低，有显著性差异(P＜0.05)；NK细胞百分含量增高，有显著性差异(P＜0.05)；血β-HCG定量明显降低，有非常显著性差异(P＜0.01)。服用助孕3号方两周后，治疗组30例，其中29例有效，1例妊娠维持超过既往流产天数后再次自然流产，总有效率96.7％。实验组用药后比用药前CD3+变化无显著性差异(P＞0.05)；用药后CD8+增高，CD4+、CD4+／CD8+、NK细胞百分含量降低，有非常显著性差异(P＜0.01)；血β-HCG定量用药后比用药前明显升高，有非常显著性差异(P＜0.01)。2．实验研究：四组比较，CD3+、CD8+的差别无显著性差异(P＞0.05)。造模组CD4+、CD4+／CD8+最高，与其他三组比较有非常显著性差异(P＜0.01)。助孕3号组、黄体酮组与造模组比较，CD4+、CD4+／CD8+明显降低，有非常显著性差异(P＜0.01)。助孕3号组、黄体酮组与正常妊娠组比较，CD4+、CD4+／CD8+无显著性差异(P＞0.05)。造模组与正常妊娠组比较，蜕膜组织Fas表达的平均染色指数明显增高，有非常显著性差异(P＜0.01)。助孕3号组、黄体酮组与造模组比较Fas表达均明显减低，有明显的差异性(P＜0.01)。助孕3号组、黄体酮组与正常妊娠组比较，Fas变化不明显，差异不具有显著性(P＞0.05)。造模组与正常妊娠组比较，FasL表达的平均染色指数降低，有显著性差异(P＜0.05)。助孕3号组、黄体酮组与造模组比较FasL表达均增高，有显著性差异(P＜0.05)。助孕3号组、黄体酮组和正常妊娠组比较，FasL染色强度指数变化不明显，差异不具有显著性(P＞0.05)。结论1．早期自然流产患者外周血中CD4+含量和CD4+／CD8+比值明显上升，CD8+含量下降，NK细胞百分数增多。T淋巴细胞亚群比例的失调，外周血NK细胞含量的升高可能是自然流产的发病原因之一。本研究显示，补肾健脾复方助孕3号方可以使早期自然流产患者外周血中CD8+增高、使CD4+、CD4+／CD8+和NK细胞含量降低。2．肾虚黄体抑制流产孕鼠与正常早孕大鼠比较，外周血中CD3+、CD8+无明显变化，CD4+、CD4+／CD8+有明显升高，蜕膜组织的Fas表达增高，FasL表达降低，提示早期流产淋巴细胞亚群比率失调，细胞免疫功能过度，Fas／FasL介导的AICD机制平衡失调，导致妊娠丢失。3．助孕3号方可以降低肾虚黄体抑制流产孕鼠外周血CD4+、CD4+／CD8+，纠正淋巴细胞亚群比率失调，还可以增加蜕膜组织FasL表达、降低Fas表达。由此推出，助孕3号方可能通过纠正淋巴细胞亚群比率失调，恢复CD8+T淋巴细胞和CD4+T淋巴细胞在机体免疫应答过程中的免疫协调作用，并通过增加蜕膜组织FasL表达，降低Fas表达，使受异体抗原刺激增生的Fas阳性T淋巴细胞及时凋亡，Pas／FasL介导的AICD机制恢复平衡协调，从而起到安胎的作用。