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目的：探讨柚皮素（naringenin,NAR）对1型糖尿病（diabetes mellitus,DM）小鼠心肌损伤的保护作用和对可能作用机制—腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）/核因子E2相关因子2（nuclear factor-E2-related factor2,Nrf2）/血红素加氧酶1（heme oxygenasel1,HO-1）信号通路—初步研究。
方法：随机选择50只雄性小鼠[种属C57BL/6，体重（20.8±0.5）g]，先自由进食进水喂养1周，然后随机分成正常组（N组）和模型组（M组）。1型DM小鼠模型的建立选择连续腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）的方式，建模成功的标志是连续3天测得尾尖血糖大于16.7mmol/L。对M组小鼠按上述方法进行建模。然后将M组随机分成糖尿病组（D组）、低剂量柚皮素干预组（D+L-NAR组）、中等剂量柚皮素干预组（D+M-NAR组）、高剂量柚皮素干预组（D+H-NAR组）。对各个干预组小鼠分别给予低、中、高剂量NAR灌胃，N组和D组给予与D+M-NAR组等体积生理盐水灌胃，每天1次，共6周。实验结束时处死小鼠，通过组内纵向对比及组间横向对比，观察NAR对1型DM小鼠血糖的影响；运用HE染色的方式观察1型DM小鼠心脏组织病理变化；运用Masson染色的方式观察1型DM小鼠心脏间质纤维化程度并计算心肌胶原容积分数(collagen volume fraction，CVF)；通过免疫组织化学染色观察1型DM小鼠心脏组织中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-10的蛋白水平；通过TUNEL染色及计算凋亡率评估1型DM心肌细胞凋亡情况；通过荧光探针DHE测定1型DM心肌细胞中活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)的生成；心脏组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性用相应试剂盒测定；Western blot测定1型DM心脏组织p-AMPKα、AMPKα、Nrf2、HO-1、NAD(P)H：醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase1，NQO1]和cleaved caspase-3的蛋白水平。
结果：N组小鼠前后自身血糖差异无统计学意义，D组和NAR干预组小鼠成模后血糖明显升高；NAR干预后较成模时有所降低；和N组小鼠血糖比较，M组小鼠血糖有明显升高，和D组小鼠血糖比较，NAR干预组小鼠血糖有所下降。与N组相比，D组心肌细胞排列紊乱，蓝染胶原纤维增多，CVF明显增大，凋亡率明显增加，IL-6、cleaved caspase-3蛋白水平升高，IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平降低，ROS生成率和MDA含量升高，SOD活性降低(P＜0.05)；与D组相比较，NAR干预组心肌细胞排列较整齐，蓝染胶原纤维减少，CVF明显降低，IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平降低，IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平升高(P＜0.05)；ROS生成率，MDA含量和SOD活性在D组与D+L-NAR组的差异无统计学显著性；和D组比较，D+M-NAR组及D+H-NAR组的ROS生成率及MDA含量减少，SOD活性升高(P＜0.05)。
结论：1.1型DM小鼠心肌损伤与氧化应激、炎症损伤、心肌纤维化和心肌细胞过度凋亡相关；2.NAR能减轻1型DM小鼠心肌氧化应激水平、炎症损伤、心肌纤维化及心肌细胞凋亡，且可降低1型DM小鼠血糖；3.NAR减轻1型DM小鼠心肌损伤可能与激活AMPK/Nrf2/HO-1信号通路相关。
方法：随机选择50只雄性小鼠[种属C57BL/6，体重（20.8±0.5）g]，先自由进食进水喂养1周，然后随机分成正常组（N组）和模型组（M组）。1型DM小鼠模型的建立选择连续腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）的方式，建模成功的标志是连续3天测得尾尖血糖大于16.7mmol/L。对M组小鼠按上述方法进行建模。然后将M组随机分成糖尿病组（D组）、低剂量柚皮素干预组（D+L-NAR组）、中等剂量柚皮素干预组（D+M-NAR组）、高剂量柚皮素干预组（D+H-NAR组）。对各个干预组小鼠分别给予低、中、高剂量NAR灌胃，N组和D组给予与D+M-NAR组等体积生理盐水灌胃，每天1次，共6周。实验结束时处死小鼠，通过组内纵向对比及组间横向对比，观察NAR对1型DM小鼠血糖的影响；运用HE染色的方式观察1型DM小鼠心脏组织病理变化；运用Masson染色的方式观察1型DM小鼠心脏间质纤维化程度并计算心肌胶原容积分数(collagen volume fraction，CVF)；通过免疫组织化学染色观察1型DM小鼠心脏组织中白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和IL-10的蛋白水平；通过TUNEL染色及计算凋亡率评估1型DM心肌细胞凋亡情况；通过荧光探针DHE测定1型DM心肌细胞中活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)的生成；心脏组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)活性用相应试剂盒测定；Western blot测定1型DM心脏组织p-AMPKα、AMPKα、Nrf2、HO-1、NAD(P)H：醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase1，NQO1]和cleaved caspase-3的蛋白水平。
结果：N组小鼠前后自身血糖差异无统计学意义，D组和NAR干预组小鼠成模后血糖明显升高；NAR干预后较成模时有所降低；和N组小鼠血糖比较，M组小鼠血糖有明显升高，和D组小鼠血糖比较，NAR干预组小鼠血糖有所下降。与N组相比，D组心肌细胞排列紊乱，蓝染胶原纤维增多，CVF明显增大，凋亡率明显增加，IL-6、cleaved caspase-3蛋白水平升高，IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白水平降低，ROS生成率和MDA含量升高，SOD活性降低(P＜0.05)；与D组相比较，NAR干预组心肌细胞排列较整齐，蓝染胶原纤维减少，CVF明显降低，IL-6和cleaved caspase-3蛋白水平降低，IL-10、p-AMPKα、Nrf2、HO-1和NQO1蛋白水平升高(P＜0.05)；ROS生成率，MDA含量和SOD活性在D组与D+L-NAR组的差异无统计学显著性；和D组比较，D+M-NAR组及D+H-NAR组的ROS生成率及MDA含量减少，SOD活性升高(P＜0.05)。
结论：1.1型DM小鼠心肌损伤与氧化应激、炎症损伤、心肌纤维化和心肌细胞过度凋亡相关；2.NAR能减轻1型DM小鼠心肌氧化应激水平、炎症损伤、心肌纤维化及心肌细胞凋亡，且可降低1型DM小鼠血糖；3.NAR减轻1型DM小鼠心肌损伤可能与激活AMPK/Nrf2/HO-1信号通路相关。