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目的：星形细胞瘤是脑内常见的肿瘤,目前没有十分有效的疗法.恶性胶质瘤常用外科手术、放疗和化疗,但预后较差.青蒿素及其衍生物是安全有效的抗疟疾药物,近来发现其具有较好的抗肿瘤作用.能够选择性杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞毒性很小.二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素在体内的主要活性代谢产物,其抗肿瘤活性大于青蒿琥酯和青蒿素.并且,DHA能够穿过血脑屏障,因而,可能对脑内肿瘤的治疗有一定作用.我们的实验是研究DHA对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响.
方法：在培养的C6细胞,加入DHA 1～125μmol/L作用24、48、72h.以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst 33342染色,观察细胞凋亡;以H<,2>DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygenspecies,ROS)变化.
结果：(1)DHA 5-125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC<,50>是23.4μmol/L.(2)5μmol/L DHA作用24h时后即可诱导凋亡(P<0.05),48 h后凋亡率可达到30﹪以上(P<0.01);25μmol/L凋亡率接近50﹪.(3)5～125μmol/L增高细胞内的ROS(P<0.01),5μmol/L可增加ROS达1倍;25μmol/L可增加2倍左右;125μmol/L增加4倍以上.
结论：
1.DHA能够抑制C6细胞增殖,诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关.
2.DHA能够杀伤肿瘤细胞,并能穿过血脑屏障,可能成为治疗脑内胶质瘤的有效成分.
目的：半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTS)是花生四烯酸经5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)途径代谢产生的重要炎症介质,参与外周炎性疾病以及脑卒中、脑外伤、脑肿瘤等中枢神经系统疾病的病理生理过程.CvsLTs的作用由cysLT<,1>和CysLT<,2>受体介导.已经初步证明,CysLTs启动受体后,通过激发细胞内贮存Ca<2+>释放而发挥效应.我们已经发现CysLT<,1>受体参与大鼠和小鼠的脑缺血损伤.CysLT<,1>受体有选择性拮抗剂,但存在非受体效应,还需要继续寻找新的化合物;而对于CysLT<,2>受体尚无选择性拮抗剂,因此,对其功能了解较少.本研究目的为了建立细胞模型及筛选方法,初筛CysLT<,1>受体拮抗剂,为进一步寻找新的化合物及研制新药提供基础.
方法：选用分化后高表达CysLT<,1>受体的人白血病细胞株dU937细胞,激动剂LTD<,4>攻击后检测细胞内Ca<2+>浓度变化,作为CysLT<,1>受体拮抗剂的筛选方法,初步筛选有拮抗剂活性的化合物,以cysLT<,1>受体拮抗剂pranlukast和montelukast作为参照;并进一步在人脐静脉内皮细胞缺氧缺糖损伤(OGD)模型上观察初筛化合物抗损伤作用.
结果：dU937细胞高表达CysLT<,1>受体蛋白.阳性刺激物ATP 5×10<-5> M能显著升高du937细胞内钙(30﹪);LTD<,4> 10<-7>M的作用约为ATP的56﹪.cysLT<,1>受体拮抗剂pranlukast和montelukast能抑制LTD<,4>诱导的du937细胞内钙升高,IC<,50>分别为9.2×10<-8>.M和7.5×10<-8>M.新合成的化合物Dxw.1、10、11、12、13、19也能部分抑制LTD<,4>诱导的钙信号,IC<,50>在2.2×10<-8>.M至2.4×10<-7>M之间,最大抑制率19﹪～23﹪.D<,xw>-10、11、12在10<-6>M对人脐静脉内皮细胞没有毒性作用,但也不能抑制OGD引起的损伤;而同浓度pranlukast有保护作用.
结论：
1.dLl937细胞可以作为CysLT<,1>受体细胞模型;在此细胞上确定了Ca<2+>测定条件,建立了初步筛选CysLT<,1>受体拮抗剂的方法.
2.CysLT<,1>受体选择性拮抗剂pranlukast和montelucast能够抑制LTD4诱导的乱1937细胞内钙升高,并能减轻内皮细胞OGD损伤;化合物Dxw-1、10、11、12、13、19能够抑制LTD<,4>诱导的细胞内钙升高,具有一定的受体拮抗剂样活性,但D<,xw->10、11、12不能减轻内皮细胞OGD损伤,是否为CysLT<,1>受体拮抗剂还需要进一步验证.