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β-葡聚糖酶广泛的应用于是啤酒酿造、饲料加工、功能性食品制造、环境保护以及纺织等工业领域中。但是,目前为止所报道的β-葡聚糊酶的酶活力较低,耐热性较差,限制了 β-葡聚糖酶的应用。本研究以黑曲霉为出发菌株,利用毕赤酵母表达β-葡聚糖酶基因,并对β-葡聚糖酶性质进行研究。主要研究内容如下:首先,根据黑曲霉CBS 513.88基因组测序的注释信息,以黑曲霉CICIM F0510为出发菌株,利用RT-PCR技术成功扩增出3个内切β-1.3(4)-葡聚糖酶的基因en3gA、en3gB、en3gC,其大小分别为1298 bp,1191 bp和1553 bp;其中en3gA、en3gB的核苷酸序列和氨基酸序列与黑曲霉CBS 513.88基因组来源的序列完全一致,而en3gC与黑曲霉CBS 513.88相比较,多出第五个内含子,101个氨基酸,其它序列一致。其次,利用毕赤酵母表达系统,构建并表达了 3个产内切β-1,3(4)-葡聚糖酶的酵母重组菌株 GS115-En3gA,GS115-En3gB,GS115-En3gC。另外,以羧甲基纤维素钠为底物测定重组内切β-1,3(4)-葡聚糖酶GS115-en3gA、GS115-en3gB、GS115-en3gC的酶活,在摇瓶水平上,这三株重组菌的酶活分别为1.3 U/mL、8.5 U/mL和10.1 U/mL。通过SDS-PAGE电泳检测重组酶蛋白分子大小分别为44.4 kDa、43.6kDa和53.0kDa,与预测大小相符。重组酶GS115-en3gA的最适作用温度和pH分别为65℃和5.5,在55～70℃和pH 4.0～5.5条件下具有良好的稳定性;重组酶GS115-en3gB的最适作用温度和pH分别为50℃和5.0,在45～70℃和pH 4.5～5.5条件下具有良好的稳定性;重组酶GS115-en3gC的最适作用温度和pH分别为55℃和3.5,在40～45℃和pH 2.0～4.5条件下具有一定的稳定性,热稳定性较差。最后,对三种重组酶水解羧甲基纤维素钠(CMC-Na)和凝结多糖进行研究,发现重组酶均具有典型的内切水解作用,此外,只有重组酶GS115-en3gA水解凝结多糖时产生了葡萄糖,对凝结多糖的作用方式不同于其它两个重组酶。