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第一部分:猪SIS、UBM和AVM的制备和检测目的:摸索制备猪SIS、UBM和AVM的有效方法,并对比其生物力学性能和生长因子含量。方法:应用物理、化学和酶学相结合的方法制备猪SIS、UBM和AVM,而后通过HE染色、DAPI染色和DNA含量及片断大小的分析评估脱细胞方法是否有效。通过拉伸试验对比其生物力学性能、ELISA法对比其生长因子含量。结果:应用物理、化学和酶学相结合的方法,我们成功制备了脱细胞基质材料SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk,它们在组织结构、生物力学和生长因子含量上均存在一定的差异。5%过氧乙酸在增加材料孔隙率的同时,也降低了材料的生物力学性能,并大大降低了材料的生长因子含量。结论:应用物理、化学和酶学相结合的方法可成功制备SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料。第二部分:大鼠脂肪干细胞的分离、培养和鉴定及脱细胞基质材料的生物相容性目的:建立一套分离培养大鼠ASCs的稳定的培养方法。评估SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料的生物相容性。方法:应用0.1%Ⅰ型胶原酶消化法分离培养大鼠腹股沟处ASCs,并应用流式检测其细胞表面标记物,成脂成骨定向诱导分化检测其多向分化潜能。应用直接接触MTT定量检测法和激光共聚焦显微镜观察细胞形态的定性检测方法对六种支架材料进行体外细胞毒性实验。应用皮下移植,组织学观察法对六种支架材料进行体内相容性检测。结果:应用酶消化法成功分离培养了大鼠腹股沟处ASCs,其表面标记物的表达符合ASCs的表达,具有成脂和成骨分化的潜能。ASCs在六种支架材料上生长状态良好,打孔材料上的细胞生长优于未打孔材料,SISk、AVMk和AVM的促细胞生长状况最好。皮下移植试验也显示六种支架材料均具有良好的生物相容性。结论:应用酶消化法可成功分离培养大鼠腹股沟处ASCs。SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料均具有良好的生物相容性,以SISk、AVMk和AVM最优。第三部分:不同脱细胞基质材料构建大鼠阴道的比较目的:构建大鼠阴道部分切除手术模型。验证SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk能否成功构建组织工程阴道,并对其进行比较。方法:通过切除大鼠全子宫及部分阴道组织构建大鼠阴道部分切除手术模型。应用SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk对其进行组织工程阴道重建,并利用大体形态观察、一般微观形态观察及免疫组化方法对新阴道进行形态学评估;应用组织浴槽法对新阴道进行功能学评估。结果:应用SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk可成功构建大鼠组织工程阴道。打孔支架材料的形态学评估优于非打孔支架材料。SISk组、UBM组、UBMk组、AVM组和AVMk组对药物的收缩和舒张作用要强于SIS组。AVMk组无论从形态学还是功能学来说均优于其他组。结论:SIS、SISk、UBM、UBMk、AVM和AVMk六种脱细胞基质材料均可成功构建大鼠组织工程阴道。AVMk构建的组织工程阴道形态结构和功能最好。第四部分:脂肪间充质干细胞复合AVMk构建大鼠组织工程阴道目的:构建大鼠阴道全切手术模型。验证ASCs复合AVMk构建的大鼠组织工程阴道是否优于单纯应用AVMk。方法:通过阴式切除大鼠全阴道构建大鼠阴道全切手术模型。应用AVMk复合或不复合ASCs构建大鼠组织工程阴道。并利用大体形态观察、一般微观形态观察对新阴道进行形态学评估;应用免疫荧光方法检测移植ASCs的增殖分化作用;应用组织浴槽法对新阴道进行功能学评估。结果:应用AVMk复合或不复合ASCs均可成功构建大鼠组织工程阴道。ASCs可分化为肌细胞、成纤维细胞、神经细胞及雌激素受体表达细胞,可能分化为血管内皮细胞,促进组织的再生。AVMk复合ASCs构建的组织工程阴道无论从形态学还是功能学来说均优于未种细胞组。结论:ASCs通过直接分化作用可促进组织工程阴道的重建。