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目的：探讨GSK3β对模拟缺血再灌注诱导的HepG2细胞自噬的调节作用。 方法：体外培养HepG2细胞;稳定转染GSK-3β激酶死亡基因(GSK-3beta-KD);模拟肝缺血再灌注损伤;Western blotting检测下列指标:1)未转染的HepG2细胞缺血再灌注后的自噬变化(LC3-Ⅱ)和激酶活性(mTOR、GSK-3β)变化关系;2)稳转GSK-3beta-KD基因的HepG2细胞缺血再灌注后的自噬变化和激酶活性变化;3)HepG2细胞缺血再灌注IGF-1干扰后的上述指标变化。 结果：1)正常培养的HepG2,细胞模拟缺血120min,再灌注9h内,LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ表达逐渐增加,9h最高,12h后稍有下降,直到再灌注24h仍维持高水平。磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值、磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值均在再灌注6h表达明显增加,12h到达顶峰(p<0.05),24h表达下调。结果表明缺血再灌注诱导HepG2细胞自噬增强,同时伴随GSK-3β磷酸化活性降低,mTOR磷酸化活性增强。2)稳转GSK-3βKD的HepG2细胞与未转染的HepG2细胞比较,模拟缺血120min,再灌注9h内,LC3-Ⅱ表达增加,自噬活性升高,9h之后与未转染HepG2细胞自噬水平无显著差异;磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值表达增加,磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值表达下降。稳转GSK-3βKD的HepG2细胞IR处理与未IR处理其LC3-Ⅱ含量即自噬水平无变化,磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值表达下降,磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值表达基本无变化。结果表明稳转GSK-3βKD的HepG2细胞缺血再灌注诱导自噬水平无变化,磷酸化的GSK-3β下降,磷酸化的mTOR比值表达基本无变化。与未转染的HepG2细胞相比,缺血再灌注诱导稳转GSK-3βKD的HepG2细胞自噬增强,同时伴随GSK-3β磷酸化活性降低,mTOR磷酸化活性增强。 3)正常培养的HepG2,细胞模拟缺血120min,再灌注时IGF-1处理组与未处理组比较LC3-Ⅱ表达增加,自噬进一步激活,9小时后随着未处理组自噬活性升高,IGF-1处理组与未处理组自噬活性无明显差异;磷酸化的GSK-3β、p-GSK-3β/t-GSK-3β比值表达降低,且维持在一个相对稳定水平;磷酸化的mTOR、p-mTOR/t-mTOR比值表达再灌1h时降低,之后逐渐升高,9h之后又逐渐恢复至未加IGF-Ⅰ处理时。结果表明HepG2细胞缺血再灌注时IGF-1处理自噬进一步增强,同时伴随GSK-3β磷酸化活性增强,mTOR磷酸化活性先降低,然后又增强,随自噬活性变化。 结论：1.缺血再灌注诱导HepG2细胞自噬增强,同时伴随GSK-3β磷酸化活性降低,mTOR磷酸化活性增强。 2.与未转染的HepG2细胞相比,缺血再灌注诱导稳转GSK-3βKD的HepG2细胞自噬增强,同时伴随GSK-3β活性降低,mTOR活性增强。 3.稳转GSK-3βKD的HepG2细胞缺血再灌注诱导自噬水平无变化,磷酸化的GSK-3β下降,磷酸化的mTOR表达基本无变化。 4.HepG2细胞缺血再灌注时IGF-1处理自噬进一步增强,同时伴随GSK-3β活性增强,mTOR活性先降低,然后又增强,随自噬活性变化。