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背景:卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)是卡波氏肉瘤(KS)等疾病的病因,在感染宿主细胞内有潜伏(latent)和裂解(lytic)两个生命周期。潜伏相关核抗原(LANA)是建立和维持潜伏的关键因子和复制转录激活因子(RTA)是潜伏到裂解的开关。抑制RTA表达是LANA维持潜伏感染的重要机制。宿主细胞表达的重组信号结合蛋白免疫球蛋白J区(RBPJ)与LANA结合在抑制RTA的表达中发挥了重要作用。但RBPJ表达水平是否受KSHV调控以及RBPJ表达水平与KSHV裂解复制的关系尚不清楚。目的:明确LANA对let-7a/RBPJ信号通路的影响;阐明LANA调控let-7a表达的机制以及let-7a与RBPJ的直接靶向关系;研究let-7a及RBPJ对KSHV裂解复制的影响。方法:首先采用过表达和RNA干扰技术检测LANA对let-7a/RBPJ信号通路分子表达水平的影响:脂质体法转染LANA到293T细胞,以转染相应空载体为对照,northern-blot和实时荧光定量PCR(quantative real-time PCR,qPCR)检测let-7a的表达水平,pri-let-7afd、LIN28B、NF-κB和RBPJ的转录水平,western-blot检测LIN28B、NF-κB和RBPJ的蛋白水平;脂质体法转染si-LANA到iSLK.219细胞,以转染非特异siRNA为对照,检测上述指标。然后,采用过表达和RNA干扰技术改变LIN28B和NICD表达水平,检测let-7a、pri-let-7afd、RBPJ的表达水平,分析LANA调控let-7a的分子机制。进一步的,采用荧光素酶报告实验检测let-7a与RBPJ 3’UTR的靶向关系,并检测转染let-7a表达载体(过表达)或let-7 sponge(下调let-7a)对RBPJ mRNA和蛋白水平的影响,证实let-7a直接抑制RBPJ的表达。最后,分别在过表达let-7a和下调RBPJ的iSLK.219细胞中,倒置显微镜观察RFP表达以判断病毒激活状态;qPCR检测细胞内KSHV基因组的拷贝数以判断病毒复制水平;qPCR检测培养液中KSHV基因组的拷贝数以及培养液感染293T细胞的能力分析病毒子产量及感染力。结果:1.过表达LANA上调let-7a及其初始转录体pri-let-7afd,同时下调RBPJ;下调LANA则反之。2.LANA下调NF-κB、LIN28B;干扰LIN28上调let-7a,而同时干扰LANA和LIN28B则下调let-7a表达。3.LANA可上调NICD,NICD上调let-7a及其初始转录体pri-let-7afd。4.Let-7a以剂量依赖的方式抑制RBPJ 3’UTR荧光素酶报告基因活性,但对结合位点突变的RBPJ 3’UTR荧光素酶告基因活性没有影响;let-7a抑制RBPJ的表达。5.过表达let-7a以剂量和时间依赖的方式抑制KSHV的裂解激活,下调病毒复制水平和有感染力病毒子的产量。6.下调RBPJ以剂量和时间依赖的方式抑制KSHV的裂解激活,下调病毒复制水平和有感染力病毒子的产量。结论:1.LANA通过上调let-7a抑制RBPJ表达。2.LANA通过NF-κB/LIN28B调控let-7a的水平,通过NICD控制pri-let-7afd的转录。3.调控let-7a/RBPJ信号在LANA抑制KSHV裂解复制中发挥了重要作用。