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目的:研究二十二碳六烯酸(docosahexaenoicacid,DHA)联合葫芦素B(cucurbitacin B)在体外对抗人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响作用。方法:1实验分组:RPMI1640培养基配置4组用无水乙醇溶解后的DHA,终浓度分别为10、20、30、40μg/m L,对照组加入无水乙醇(<0.5%,V/V);用RPMI 1640培养基配置5组用DMSO溶解够得葫芦素B,终浓度为0.01、0.1、1、10、100μg/m L,空白组为等体积培养基,对照组为加入DMSO(<2%,V/V)。得出各药物的半对数抑制浓度(IC50)值,选取均小于单种药物IC50的DHA(20μg/m L)联合葫芦素B(10μg/m L)作用于人胃癌BGC-823细胞,对照组加入无水乙醇(<0.5%,V/V)和DMSO(<2%,V/V);2利用NADH酶染色显微镜下观察人胃癌BGC-823细胞在分别加入DHA(20μg/m L)、葫芦素B(10μg/m L)及DHA(20μg/m L)联合葫芦素B(10μg/m L)后,细胞形态学上的变化;3利用吉姆萨染色显微镜下观察人胃癌BGC-823细胞在分别加入DHA(20μg/m L)、葫芦素B(10μg/m L)及DHA(20μg/m L)联合葫芦素B(10μg/m L)后,细胞形态学上的变化;4采用四氮唑蓝比色法(MTT法),在限定时间,且不同浓度的前提下,研究DHA(10、20、30、40μg/m L)组、葫芦素B(0.01、0.1、1、10、100μg/m L)组、DHA(20μg/m L)联合葫芦素B(0.01、0.1、1、10、100μg/m L)不同浓度加药组对胃癌BGC-823细胞增值的影响;5通过流式细胞检测法分别检测DHA(20μg/m L)加药组、葫芦素B(10μg/m L)加药组、DHA(20μg/m L)联合葫芦素B(10μg/m L)加药组细胞周期及凋亡的情况;6所有数据用mean±SD表示,采用SPSS16统计软件包行单因素方差分析,在某些实验中用双因素方差分析、Pearson相关分析,P<0.05表示有统计学意义。结果:1 NADH酶染色法在显微镜下明显可见相同时间下,随着药物浓度的增加,DHA(20μg/m L)加药组、葫芦素B(10μg/m L)加药组细胞凋亡现象愈加明显,且DHA(20μg/m L)联合不同浓度葫芦素B组用药组凋亡比DHA(20μg/m L)组、葫芦素B(10μg/m L)组更为彻底。2吉姆萨染色法在显微镜下明显可见相同时间下,随着药物浓度的增加,DHA(20μg/m L)加药组、葫芦素B(10μg/m L)加药组细胞凋亡现象愈加明显,且DHA(20μg/m L)联合不同浓度葫芦素B组用药组凋亡比DHA(20μg/m L)组、葫芦素B(10μg/m L)组更为彻底。3根据MTT法,限定用药时间,DHA加药组、葫芦素B加药组、DHA(20μg/m L)联合葫芦素B不同浓度加药组对人胃癌BGC-823细胞的增值抑制作用呈浓度依赖性作用,且联合用药组比分别利用DHA、葫芦素B直接作用其细胞增殖抑制更为明显,更有效的降低了细胞的存活率,且在相同时间随着药物浓度的提高,作用效果也随之提高。作用效果以公式(CI)=AB%/A%×B%计算,(CI=1表示相加,<1表示协同,>1表示拮抗)。选用均低于单药IC50值得DHA20μg/m L联合葫芦素B10μg/m L对细胞抑制率的CI为0.591±0.105,说明联合用药具有协同作用。4流式细胞检测肿瘤细胞DHA联合葫芦素B加药组,G0/G1细胞明显增多,G2/M和S期细胞明显减少。结论:通过分组实验,证实DHA联合葫芦素B可抑制人胃癌BGC-823增值及诱导细胞凋亡,且在相同时间随着药物浓度的提高,作用效果也随之提高,其联合具有协同作用。