论文部分内容阅读
鸡球虫病是一种呈全球性分布的原虫病,其发病率可高达50%~70%,死亡率为20%~30%,严重者高达80%。每年,全世界因球虫病造成的经济损失超过30亿美元。虽然使用抗球虫药这种传统方法在球虫病防治中发挥了积极的作用,但是球虫耐药株的不断出观、公众对药物残留的恐惧以及新药研制的缺乏,使得活疫苗接种在不久的将来会成为控制球虫病的主要措施。因此,我们开展了本项研究,并取得如下结果:(1)改进了单卵囊分离技术,成功分离到柔嫩、毒害、巨型、堆型、和缓、布氏和早熟艾美耳球虫兰州株;克隆了堆型艾美耳球虫全长1.7Kb的18S rRNA基因,分析了其遗传、进化特点,为从分子水平上研究艾美耳球虫种系发生、遗传进化、虫种分类与鉴定等奠定了基础。(2)测定了所分离虫株的毒力(即致病性)。实验证实:每只鸡感染6×10~4个孢子化卵囊时,引起较严重的肠道病变,生长严重受阻:每只鸡感染9×10~5~1.2×10~6个孢子化卵囊时,约半数感染鸡致死;而1.8×10~6个孢子化卵囊的感染剂量可致全部感染鸡死亡。这为进行疫苗配制及其免疫效果评价时选择适宜的攻虫剂量提供了参考依据。(3)研制出四价鸡球虫病活疫苗(LCV)、五价鸡球虫病活疫苗(LCV-1)和六价鸡球虫病活疫苗(LCV-2),在实验条件下,给5-10日龄雏鸡经口接种疫苗,两周后用与疫苗同源的混合孢子化卵囊大剂量攻虫,以相对增重率、死亡率、肠道剖检病变计分,平均OPG值和抗球虫指数(ACI)为评价指际,观察了这三种疫苗的安全性和免疫效果。筛选出了最佳免疫剂量,结果也证实了这三种疫苗安全性高,免疫保护效果显著,与国内外同类疫苗相当。(4)对比研究了LCV-2号对笼养和平养鸡的免疫效果,证实LCV-2对笼养鸡和平养鸡都有较强的免疫效果,而且LCV-2安全性高,即使漏免也不会造成鸡只发病。(5)评价了两种β-葡聚糖对LCV的免疫增强效果。结果表明,在攻虫后7天和14天,所有免疫组鸡的体重均极显著(P<0.01)高于攻虫对照组、香菇糖组和酵母糖组,而香菇糖+LCV免疫组和酵母糖+LCV免疫组鸡的体重均又显著高于LCV免以组,攻虫后14天,香菇糖+LCV免疫组体重还显著高于酵母糖+LCV免疫组;在攻虫后卵囊排出量、免疫器官指数尤其胸腺指数和脾淋巴细胞增殖等指际上都有类似结果。说明两种β-葡聚糖都能作为鸡球虫疫苗的免疫增强剂,增强疫苗的免疫效果,其中香菇β-葡聚糖优于酵母β-葡聚糖。