阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)是近年乳制品中新发现的一种致病菌,已被世界卫生组织和许多国家确定为引起婴幼儿死亡的重要条件致病菌,死亡率高达50%。建立阪崎肠杆菌快速而特异性的富集和检测方法,是有效控制和预防食品中阪崎肠杆菌污染的关键所在。本研究基于免疫技术的发展现状,制备了阪崎肠杆菌免疫磁性微球和免疫荧光探针。主要通过免疫磁性微球富集和免疫荧光探针标记技术相结合的检测技术实现阪崎肠杆菌的高灵敏度、快速检测,以克服传统检测技术、分子生物学检测技术及单一免疫检测技术存在的缺陷。为免疫技术在致病性微生物检测领域的研究和应用提供有力的科学基础和理论依据。主要结果如下：(1)建立了一种快速高效制备阪崎肠杆菌多克隆抗体的方法。采用皮下多点注射与耳缘静脉注射相结合的短程免疫方法用阪崎肠杆菌颗粒性抗原免疫新西兰大白兔,抗血清在免疫19天后即可获得,纯化后的效价高达1：20480,完全满足免疫检测的需求。特异性研究结果表明所制备的多克隆抗体对阪崎肠杆菌有高度的特异识别性,与近缘菌株大肠杆菌、产气肠杆菌和阴沟肠杆菌无交叉反应。并首次鉴定了阪崎肠杆菌的颗粒性抗原蛋白为丙酮酸脱氢酶E1和分子伴侣蛋白GroEL。本研究制备多克隆抗体的方法新颖、简单且高效。(2)以壳聚糖和纳米四氧化三铁为原料,采用反向悬浮交联法制备了磁性壳聚糖微球,并对其进行了表征。结果表明磁性壳聚糖微球呈均一的球状,粒度均匀；具有很好的磁响应性、超顺磁性及热稳定性。表面光滑、致密,无孔,在后期的利用过程中可以减少非特异性吸附。(3)对磁性壳聚糖微球的表面用氯乙酸进行羧基改性,制备了表面羧基化磁性壳聚糖微球。然后利用N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),1-乙基(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC·HC1)将表面羧基化磁性壳聚糖微球和阪崎肠杆菌的多克隆抗体的氨基进行偶联,制备了第一种免疫磁性微球。最佳的偶联条件为：微球的用量为0.01 g,活化缓冲液pH为5.4,偶联时间为80 min。0.01 g微球对12.6 mg/mL抗体溶液的饱和偶联量为25μL。同时研究了该免疫磁性微球对阪崎肠杆菌的富集效果,结果表明：免疫磁性微球的最佳用量选择0.01 g,在37℃、pH 7.4时,富集60 min，对阪崎肠杆菌的富集效果最好。所制备的免疫磁性微球对阪崎肠杆菌的富集有高度的特异性,与近缘菌株无交叉反应,灵敏度高达到6cfu/mL。免疫磁性壳聚微球的重复利用结果表明：每次用Gly-HCl缓冲液(0.1 mol/L, pH2.5)洗脱7 mmin,重复利用次数达到19次以上。(4)对磁性壳聚糖微球的表面用乙二胺进行氨基改性,制备表面氨基化磁性壳聚糖微球。然后利用戊二醛将表面氨基化磁性壳聚糖微球和阪崎肠杆菌多克隆抗体进行偶联,制备的了第二种免疫磁性微球。最佳的偶联条件为：微球的用量为0.01 g,偶联缓冲液pH为7.4,偶联时间为20min。0.01 g微球对12.6mg/mL抗体溶液的饱和偶联量为50μ.L。同时研究了该免疫磁性微球对阪崎肠杆菌的富集效果,结果表明：免疫磁性微球的最佳用量选择0.01 g,在37℃、pH 7.4时,富集45 min,对阪崎肠杆菌的富集效果最好。所制备的免疫磁性微球对阪崎肠杆菌的富集有高度的特异性,与近缘菌株无交叉反应,灵敏度高达到4 cfu/mL。免疫磁性微球的重复利用结果表明：每次用Gly-HCl缓冲液(0.1mol/L、pH2.5)洗脱9 min,重复利用次数达到27次以上。同时研究表明第二种免疫磁性微球对阪崎肠杆菌的富集效果好于第一种免疫磁性微球。(5)本研究以巯基化合物为稳定剂,首次采用超声波辅助并用盐水浴加热的方法在pH为10的条件下,105℃回流合成了不同发射波长、荧光强度高、稳定性高、荧光寿命长的水溶性核壳结构CdTe/CdS多色量子点。合成方法简、高效且快速,为核壳结构水溶性量子点制备开拓一片新领域。所制备的量子点呈球形,单分散性好,粒径大约4 nm左右。荧光寿命为600 ms以上,室温避光放置24个月,荧光强度几乎没有降低。(6)本研究将阪崎肠杆菌多克隆抗体与CdTe/CdS半导体量子点利用EDC和NHS进行偶联,制备了免疫荧光探针,最佳制备条件为：CdTe/CdS量子点的用量为125 pL,抗体的用量为75 μL,反应体系的pH为8.2,反应温度为35℃,反应时间为2 h。所制备的免疫荧光探针与CdTe/CdS量子点相比荧光强度增强,荧光寿命无显著变化,有很大的应用价值和潜力。(7)建立了免疫磁性微球富集和免疫荧光探针标记相结合的快速检测阪崎肠杆菌的方法,并利用该方法对牛奶中的阪崎肠杆菌进行了检测。检测条件为：250 mL待检样品稀释液中加入0.05 g免疫磁性微球,调节pH为7.4,37℃振荡富集60 min,磁分离并洗涤后加入50μL免疫荧光探针,37℃振荡标记60 min,整个检测时间为2 h。研究结果表明该方法对阪崎肠杆菌的检测具有高度的特异性、与近缘菌株无交叉反应,准确度高、时间稳定性好,检测限为15 cfu/mL。婴幼儿食品中阪崎肠杆菌的污染问题已经引起人们的高度重视,但是目前还没有成熟的快速检测技术来对该致病性微生物进行检测与监控,本研究通过制备阪崎肠杆菌免疫磁性微球和免疫荧光探针,将免疫磁分离技术和荧光探针标记技术结合起来用于阪崎肠杆菌的快速检测,为致病性微生物的快速检测技术的发展提供理论依据。