应激是一个普遍存在的生活事实,是一切生命为了生存和发展所必须的,它是机体整个适应、保护机制的一个重要组成部分。但是,心理、社会因素作为应激原引起的劣性应激会导致不同程度的躯体、心理障碍。据现代研究证实,情绪应激对人类的健康具有不容忽视的影响。因此研究应激的动物模型和能够直接影响应激的药物对于临床实践具有重要的指导意义。本课题为国家自然科学基金资助项目(№:30000216)与霍英东教育基金资助项目(№:81037)的分题之一,通过理论研究和实验研究两部分来探讨应激的机理以及中医药对应激的作用。理论研究1.应激的概念及分期应激是机体受到强烈刺激,处于“紧张状态”时,为提高机体的适应能力和维持内环境的稳定而出现的一系列非特异性的全身反应。内分泌学家 Selye 将其称之为全身适应综合症,并将其分为三期:警觉期、抵抗期和衰竭期。2.应激反应对机体的影响机体的应激反应受神经系统启动,通过神经内分泌引起一系列生理反应。首先发生交感神经-肾上腺髓质反应,导致体内儿茶酚胺分泌增多。随之下丘脑-垂体-肾上腺轴等内分泌轴激活,皮质醇分泌增多等,提高机体功能水平,逐步完善机体抵抗力,保持内环境稳定。倘若刺激过强或持续过久,反应过度将使机体进入衰竭。应激可以影响心血管系统、呼吸系统、各脏器血流灌注、代谢及免疫系统等许多机体功能。3.应激与免疫、神经内分泌系统间的联络机制大量实验研究资料证实,免疫系统和神经内分泌系统构成了一个相互作用的整体。免疫系统受脑的调节和调控,同时也对脑施加影响。近年对神经内分泌系统和免疫系统之间联系机制的研究取得了丰富的成果。一个重要的发现是免疫和大脑使用一种共同的生化“语言”。已有确凿的证据表明,共同的配体,如肽类激素、肽类神经递质和细胞因子及其受体,在免疫和神经内分泌系统内部及两个系统之间构成了一个信息网络。4.应激反应的调节与控制确定应激反应最适强度的界限,准确判断应激反应的强度,调控应激反应的措施是有效地调节与控制应激反应的三个重要问题。5.中医肝脏的现代研究进展中医对肝脏的认识,在《内经》中就有较为系统的论述,以后不断完善。对于肝功能的认识主要在肝主疏泄、主候外、主藏血、主筋、其华在爪、开窍在目等方面。近年来对肝实质的研究进一步表明,中医肝与神经-内分泌-免疫网络有密切关系。对肝实质的研究主要包括“肝为罢极之本”的研究、“肝其华在爪”的研究、“肝开窍于目”的研究、“肝合胆”的研究、“怒伤肝”的研究、“肝病传脾”的研究、“肝脉弦”、“肝应春”的研究等方面。<WP=5>2 慢性束缚应激中枢 L-ENK 与肝主疏泄相关性研究6.应激与中医肝脏的关系中医学认为人体气机的变化是机体在应激反应中所出现的重要的生理或病理反应,并由此导致一系列其他的生理或病理改变。而肝是人体应激机制的调节中心,应激反应是否对机体造成损害或损害的程度有多大在很大程度上取决于肝的功能正常与否,中医“肝主疏泄”的功能在机体心理应激中起着决定性的作用,中医的肝是机体调节心理应激反应的核心。实验研究实验一 慢性束缚应激大鼠模型的建立及评价选取国家二级标准的 SD 大鼠,体重 200±20 克;随机分为正常对照组、7天模型组、21 天模型组、逍遥散组、四君子汤组、金匮肾气丸组,每组各 10 只。实验所用中药复方分别选用《太平惠民和剂局方》中的逍遥散(北柴胡 30g、当归 30g、白芍 30g、白术 30g、茯苓 30g、炙甘草 15g、生姜 10g、薄荷 10g)、四君子汤(党参 30g、白术 15g、茯苓 15g、炙甘草 10g)和《金匮要略》中的金匮肾气丸(干地黄 60g、山药 30g、山茱萸 10g、泽泻 15g、茯苓 15g、牡丹皮 15g、桂枝 10g、炮附子 10g)。三复方中的中药饮片均以严格工艺制成药粉备用。以慢性束缚方法制作应激大鼠模型,将大鼠束缚于特制的大鼠束缚架上,每日 3 小时,共 3 周(B 组为一周)。自造模第一日始,D、E、F 组每日分别灌胃逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸,三组的给药量分别为 5.82g/kg、2.62 g/kg 和 4.98 g/kg,灌胃容积为 1ml/kg 体重,根据大鼠每日体重随时调整给药量。A、B、C 组则灌胃等体积的蒸馏水,F 组于第一周后取材,其于各组 3 周后取材。造模过程中,注意观察大鼠外观形态。每日称量大鼠体重,并计算饮食量的变化。结果如下:一般状态的观察:从外观上看,模型组大鼠出现神态倦怠、扎堆懒动、造模时抗争不积极、毛发无光泽、饮食量减少伴大便稀溏表现。大鼠体重及进食量:模型组和各用药组进食量与正常对照组比较有显著下降;用药组之间,四君子汤组进食量最多。模型组和用药组大鼠体重增长明显变缓,与对照组相比均有显著性差异。与 21 天模型组相比,给药组大鼠体重增长较为明显,但无统计学差异。实验二 慢性束缚应激大鼠行为学研究大鼠分组、造模及给药方法同实验一。造模过程中 B 组于第 7 天,其余各组于第 21 天做行为学测定,包括鼠尾悬挂实验和旷场实验。结果如下:鼠尾悬挂实验:模型组挣扎次数明显少于正常对照组,而三用药组挣扎次数明?