论文部分内容阅读
背景1-硝基芘(1-nitropyrene,1-NP)是重要环境污染物硝基多环芳烃的典型代表物质,其广泛存在于人类赖以生存的环境中。1-NP主要来源于柴油汽油尾气排放,少部分也可由多环芳烃与氮氧化物经气相和非均相反应生成。研究表明,1-NP具有多种毒性作用,人体接触1-NP主要有经呼吸道和经口暴露两种途径。本研究旨在探讨孕期经口暴露1-NP对青春期子代小鼠过敏性哮喘易感性的影响。方法8周龄雌雄C57BL/6小鼠按照4:2交配得孕鼠12只,将12只孕鼠随机分为对照组和1-NP组,每组6只。1-NP组孕鼠全孕期每天给予玉米油溶解的1-NP(100μg/kg)灌胃处理,同期对照组孕鼠给予玉米油灌胃处理,每天监测记录体重和饮食量。母鼠自然分娩,仔鼠出生后(postanal day,PND)第1天记作PND1,PND4进行组内匹配,保证每窝8只仔鼠。PND21,将对照组48只仔鼠随机分为两个亚组:单纯对照组和卵清蛋白(ovablumin,OVA)组,1-NP组48只仔鼠随机分为两个亚组:1-NP组和1-NP+OVA组。OVA组和1-NP+OVA组仔鼠分别于出生后23、29、36天腹腔注射10 ml/kg OVA工作液(20μg OVA溶于0.1 m L无菌生理盐水中,并与50μL氢氧化铝佐剂充分混匀)致敏,一周后进行1%OVA雾化吸入激发,连续雾化激发3天,每天30min;对照组和1-NP组仔鼠同期执行相同体积生理盐水处理。各组末次激发24 h后,称重后采集小鼠全血和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),并留取脾脏、胸腺和肺组织。称量并记录组织重量,血球计数板法计算BALF中细胞总数,并通过瑞氏染色/迪夫快速染色计算BALF中嗜酸性粒细胞数。酶联免疫吸附试验检测血清OVA特异性免疫球蛋白E水平和肺组织中辅助性T细胞2(T helper 2,Th2)细胞因子白介素-4、白介素-5和白介素-13表达水平。同时,每组取6只小鼠左肺,用4%多聚甲醛溶液固定1周后,经石蜡包埋切片,然后进行苏木素-伊红染色检测肺脏组织气道炎性细胞浸润情况。过碘酸雪夫染色液染色用来检测气道粘液分泌,实时荧光定量PCR检测小鼠肺组织粘蛋白基因Muc5ac m RNA表达水平。此外,改良Masson三色染色检测气管平滑肌增生和气道基底膜胶原沉积情况。结果BALF计数结果和苏木素-伊红染色结果显示,孕期1-NP暴露加剧子代致敏小鼠肺气道和血管周围炎性细胞浸润,尤以嗜酸性粒细胞为主。酶联免疫吸附试验结果显示,孕期1-NP暴露对青春期子代致敏小鼠血清OVA特异性免疫球蛋白E含量无影响,但明显上调了其肺组织中Th2细胞因子白介素-5蛋白表达。过碘酸雪夫染色结果显示母体1-NP暴露可加重子代OVA致敏小鼠气道黏液分泌。改良Masson三色染色结果显示,孕期暴1-NP不加重子代致敏小鼠气道平滑肌增生和基底膜纤维化。结论综上所述,孕期暴露1-NP可增加青春期子代致敏小鼠过敏性哮喘的易感性。