NLRP3炎症小体和氧化应激在新生儿缺氧缺血性脑病中的初步作用研究

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目的研究新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)患儿母亲的胎盘组织中的NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体的蛋白质表达水平、氧化应激指标丙二醛(Malondialdehyde,MDA)及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)浓度水平,分析NLRP3炎症小体与SOD活力和MDA表达量之间的联系,研究新生儿HIE母亲胎盘表达NLRP3炎症小体蛋白及发生氧化应激的变化。材料与方法随机选取HIE患者及正常新生儿母亲的胎盘组织各30例,利用免疫组织化学技术及western blot检测NLRP3炎症小体蛋白质水平。分别选取保存于-80℃条件下的10例HIE及正常新生儿母亲的胎盘组织,测定MDA和SOD浓度水平。统计学软件分析NLRP3炎性小体、SOD、MDA之间的相关性。并进行两组胎盘组织的病理学评估。结果(1)研究发现HIE及正常新生儿母亲的胎盘显微镜分析病理组织形态有显著性差异,具体如下:(1)发现HIE患儿母亲胎盘组织存在合体滋养叶细胞结节和有细胞滋养叶细胞的终末绒毛数量分别为(30.10±5.82)个/HPF和(10.33±3.25)个/HPF,均分别高于正常新生儿胎盘的(20.40±5.56)个/HPF和(4.93±2.13)个/HPF(分别t=5.88,P=0.00;t=7.61,P=0.00);(2)HIE胎盘组织具有血管合体膜的终末绒毛数为(10.83±3.52)个/HPF,明显少于正常新生儿的(18.57±4.93)个/HPF(t=6.99,P=0.00)。(2)免疫组化结果显示,100%(30例)的HIE患儿母亲胎盘组织阳性表达NLRP3炎症小体,而正常新生儿母亲胎盘组织阳性表达为30%(9例),比较后发现两组阳性表达率间有显著性差异(χ2=-44.831,P=0.000)。Western blot显像图果显示,NLRP3炎症小体在HIE组母亲胎盘组织的表达条带明显比正常组母亲胎盘组织的表达增强。显像图用Image J软件读取灰度值,计算各组蛋白相对表达量,HIE组和正常组的NLRP3炎症小体蛋白条带的灰度值分别是0.186±0.084和0.008±0.005,HIE组的NLRP3炎症小体蛋白表达量是正常组的23.25倍(t=6.666,P=0.000)。(3)HIE新生儿母亲胎盘的氧化应激指标SOD活力为(6.40±1.40)U/mgprot,较正常新生儿母亲胎盘的(12.13±3.37)U/mgprot明显减低(t=-4.955,P=0.000)。HIE新生儿母亲胎盘的MDA含量为(11.45±3.21)nmol/mgprot,较正常胎盘的(4.89±1.66)nmol/mgprot明显增高(t=5.747,P=0.000)。(4)将免疫组化检测的NLRP3炎症小体表达结果与SOD和MDA进行相关性分析,Spearman’s等级相关分析发现NLRP3炎症小体表达结果与MDA含量呈密切正相关关系(r=0.74,P=0.000)。NLRP3炎症小体表达结果与SOD活力呈密切负相关关系(r=-0.66,P=0.000)。将western blot检测的NLRP3炎症小体表达结果与SOD和MDA进行相关性分析,Spearman’s等级相关分析发现NLRP3炎症小体表达量与MDA含量呈密切正相关关系(r=0.612,P=0.004)。NLRP3炎症小体表达量与SOD活力呈密切负相关关系(r=-0.649,P=0.002)。结论(1)HIE新生儿母亲胎盘组织都会有不同程度的病理改变,这些病理改变符合在低氧条件下导致病理组织学外观。(2)HIE新生儿母亲的胎盘组织中NLRP3炎症小体表达显著增加。(3)HIE新生儿母亲的胎盘组织中存在过度氧化应激。(4)HIE新生儿母亲的胎盘组织中的炎症反应和氧化应激具有相关性。
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