IFT139是莱茵衣藻纤毛内运输蛋白IFT复合物A中的一个重要组份。ift139在大肠杆菌中的表达、蛋白纯化及多克隆抗体的制备,对于今后研究IFT139在纤毛中的特殊作用及IFT139与其他运动相关蛋白的相互作用奠定了重要基础,也对于纤毛病进一步的研究进展提供了有利的依据。本实验(1)以pBlu-ift139质粒为模板,通过PCR方法获得两端带有相应酶切位点的ift139目的片段,并成功构建pGEX-2T-ift139、pMAL-c2-ift139与pET-28a(+)-ift139三个重组质粒。(2)将三种重组质粒转移到BL21,,进行IPTG(浓度为0.2 mmol/L)的诱导表达,GST-139、MBP-139及HIS-139三种融合蛋白在诱导后均有所表达,带有MBP标签的蛋白表达大部分分布于上清,GST标签的融合蛋白在上清和沉淀中均有分布,但表达量较低,HIS标签的融合蛋白均以沉淀的形式存在,最后选择经过亲和层析纯化后的MBP-IFT139融合蛋白作为抗原进行免疫,HIS-IFT139融合蛋白在抗体纯化时使用。(3)经过五次免疫后获得抗MBP-139的兔抗血清,采用间接ELISA的方法测定其效价达到1:256000。经过ProteinA纯化和硝酸纤维素膜纯化两步抗体纯化的方法得到的抗体经Western blotting验证,观察到在蛋白大小139 kDa附近有一条清晰的目的条带,说明特异性的IFT139多克隆抗体成功制备。