论文部分内容阅读
目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对人卵巢癌耐紫杉醇细胞株A2780/T对紫杉醇耐药性的影响,并进一步研究DHA逆转耐药的机制。方法:1、CCK-8方法检测不同浓度DHA(0-512μmol/L)对人卵巢癌敏感细胞株A2780增殖的影响,筛选出最适作用浓度。2、CCK-8方法检测不同浓度DHA(0-1000μmol/L)对人卵巢癌耐药细胞株A2780/T增殖的影响,筛选出最适作用浓度。3、用特定浓度DHA(64μmol/L及296μmol/L)分别处理A2780及A2780/T,CCK-8方法检测预处理后人卵巢癌耐药细胞株A2780/T及A2780对紫杉醇耐药性的影响4、用罗丹明试验检测不同浓度DHA(0μmol/L,11μmol/L,33μmol/L,100μmol/L,296μmol/L)联合紫杉醇(3μmol/L)作用后,A2780/T细胞对于药物外排能力的变化。5、利用流式细胞仪检测测不同浓度DHA(0μmol/L,11μmol/L,33μmol/L,100μmol/L,296μmol/L)联合紫杉醇(3μmol/L)作用后,细胞周期的分布改变。6、RT-PCR方法检测DHA作用于A2780/T细胞后MDR1 m RNA表达的变化7、Western blot检测DHA作用于A2780/T细胞后P-gp、MDR相关蛋白(MDR1,MRP,BCRP和LRP)及p38MAPK、NF-κB相关通路蛋白表达的变化。结果:1、CCK-8法检测结果显示当DHA浓度低于64μmol/L DHA对于A2780细胞毒作用可以忽略不计,选取64μmol/L作为接下来A2780的DHA作用浓度。2、CCK-8法检测结果显示当DHA浓度低于296μmol/L DHA对于A2780/T细胞毒作用可以忽略不计,选取296μmol/L作为接下来A2780/T的DHA作用浓度。3、用特定浓度DHA(64μmol/L及296μmol/L)分别处理A2780及A2780/T后,CCK-8结果显示A2780/T对于紫杉醇的IC50下降,差异有统计学意义(p<0.05),而A2780对于紫杉醇的IC50未见明显变化。4.罗丹明实验显示DHA预处理后,罗丹明在A2780/T细胞内的含量增加,且呈剂量依赖性(p<0.05)。5、流式细胞仪结果显示A2780/T细胞中处于静止期(G0/G1)的细胞百分比增加(p<0.05)。6、RT-PCR方法检测结果显示DHA可以降低A2780/T细胞MDR1m RNA表达水平。7、Western blot方法检测结果显示DHA预处理后,A2780/T细胞中P-gp及其他MDR相关蛋白蛋白(MDR1,MRP,BCRP和LRP)表达水平明显下降。通路蛋白NF-κB表达下降,P38MAPK表达未见明显变化,但其活化形式PP38MAPK表达下调。结论:DHA可以通过改变细胞周期分布,抑制P-gp及MDR相关蛋白的功能及表达,逆转卵巢癌耐药细胞的耐药性,同时该机制还可能与抑制NF-κB通路,抑制P38MAPK的磷酸化有关。