研究背景中药分散片(Dispersible Tablets of Traditional Chinese Medicine)是以中药提取物、有效部位或单体为原料,加上适宜辅料制成的能在水中迅速崩解均匀分散的片剂。中药分散片处方中含有大量高效崩解剂,无需加入酸碱泡腾剂和水溶性辅料就能在短时间内迅速崩解。其特点为应用方便、吸收快、生物利用度高,可口服或加水分散后吞服,亦可咀嚼或含吮服用。适用于老、幼和吞服困难的患者。经过二十多年的发展完善,分散片在品种、质量上都有了长足的进步,但作为分散片剂型的一个重要组成部分的中药分散片,其研究现状却不容乐观。《中国药典》2010年版一部中尚未收载中药分散片品种,在制剂通则中也无分散片的定义及检查标准。根据2014年国家食品药品监督管理局最新数据显示,分散片的生产批号共706个,其中以中药为原料药的分散片批号为127个,共56个品种,所占分散片生产批号的百分比约为18%。由此可见,我国中药分散片的发展尚处于起步发展阶段。在中药分散片的研制中,以下几个方面限制了中药分散片的发展:①中药药物选择范围小;②药物溶出度低;③崩解时限长;④矫味、掩味难。如何解决中药分散片研制中的这些共性问题已成为中药分散片发展的关键。毛冬青为冬青科植物毛冬青Ilex pubescens Hook.et Arm.的干燥根。毛冬青含有黄酮类成分、酚性成分、香豆素类、二萜类成分、甾醇、鞣质、糖类及氨基酸多种化学成分,其功效为活血通脉、消肿止痛、清热解毒。常用于治疗风热感冒、肺热喘咳、咽痛、牙龈肿痛、胸痹心痛、中风偏瘫、血栓闭塞性脉管炎、丹毒、烧烫伤、痈疽、中心性视网膜炎等疾病。现在临床上应用的毛冬青制剂有毛冬青胶囊(WS3-B-1290-93)、毛冬青注射液(WS3-B-3786-98)、毛冬青片[WS-11521(ZD-1521)-2002]三种。毛冬青胶囊、毛冬青注射液的质量标准均为采用化学反应鉴别毛冬青中有效成分。质量标准存在的问题是利用毛冬青中有效成分的理化性质进行定性鉴别并不准确,含量测定采用紫外分光光度法(UV)测定总黄酮含量,以芦丁为对照品测得总黄酮含量只是一个相对含量,结果并不准确,并且紫外分光光度法灵敏度低、专属性较差。毛冬青片质量标准中,定性采用薄层色谱(TLC)鉴别原儿茶醛,定量采用紫外分光光度法测定总黄酮含量和高效液相色谱法(HPLC)测定原儿茶醛含量,其质量标准有所提升,但薄层色谱法中以原儿茶醛为对照品鉴别毛冬青片,无法鉴别其他有效成分,应加入毛冬青对照药材溶液进行鉴别,原儿茶醛在毛冬青药材中的含量较低,亦不适合作为含量测定指标成分。在毛冬青原药材的质量控制中,一般选择含量较高的皂苷类成分进行含量测定,如:毛冬青皂苷甲,毛冬青苷元A、毛冬青皂苷B1和毛冬青皂苷B2等,而毛冬青制剂质量标准中尚未采用以上有效成分。由此可见,毛冬青制剂质量标准的提高,是毛冬青制剂研制中需要解决的重要问题。目的本课题结合合作单位九惠制药股份有限公司自有品种毛冬青胶囊为模型药物,对毛冬青提取物的吸湿性以及辅料相容性进行深入的处方前研究,在此基础上进行制备工艺及处方的研究,以崩解时限、口感为指标筛选毛冬青分散片的最优处方,并建立毛冬青分散片的质量标准,考察药物溶出情况。希望通过考察辅料对药物吸湿性的影响,建立辅料相容性的检测方法,为中药药物的处方前研究提供研究思路。系统的研究分散片制备工艺中辅料种类及用量筛选、原辅料粒径、压片压力及不良气味的矫味,为中药分散片的制备提供参考依据。重点考察分散片溶出度的测定方法,为中药分散片溶出度测定中指标成分的选取、测定方法的建立提供参考。方法一、毛冬青醇提物处方前研究采用粉末吸湿法,测定毛冬青醇提物及其与辅料混合物的吸湿率,绘制吸湿-时间曲线图,对吸湿率进行一元二次方程回归分析,以吸湿初速度、吸湿加速度、平衡吸湿时间、平衡吸湿量、临界相对湿度等吸湿参数为指标,考察毛冬青醇提物的吸湿性及辅料对其的影响。建立毛冬青醇提中原儿茶醛HPLC含量测定方法。参照药物稳定性指导原则中影响因素的实验方法,采用加速原辅料相互作用进程来研究其相容性,将毛冬青醇提物和辅料按照主药与稀释剂(1:1)、崩解剂(5:1)、润滑剂(20:1)的比例混合,在高温(60℃)、高湿[RH(90±5)%]、光照[(4500±500)lx]条件下放置10天,在0、5、10天分别取样考察性状、含量、有关物质等。二、毛冬青分散片制备工艺研究采用单因素筛选毛冬青分散片的辅料种类,以崩解时限、分散均匀性为指标,考察不同填充剂、崩解剂、润湿剂、矫味剂、润滑剂的种类及崩解剂加入方法的选择。采用星点设计-效应面法(RSM-CCD),以崩解时限为指标,以微晶纤维素(MCC)、交联聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、羧甲基淀粉钠(CMS-Na)用量为因素指标,考察其对毛冬青分散片崩解时限的影响,优选最佳制剂处方。测定中间体颗粒的休止角、堆密度及临界相对湿度,为生产提供参考。三、毛冬青分散质量标准研究建立毛冬青分散片TLC鉴别方法,以毛冬青总黄酮为指标成分,建立毛冬青分散片溶出度检查方法,并规定溶出限度。采用UV测定法建立毛冬青分散片中总黄酮的含量测定方法,建立毛冬青分散片中原儿茶醛的HPLC测定方法,测定3批中试产品的含量,设定含量限度。四、毛冬青分散片稳定性试验模拟上市包装,对所三批毛冬青分散片,经温度40℃±2℃,湿度75%±5%条件下,进行3个月加速试验。对毛冬青分散片的性状、鉴别、重量差异、分散均匀性、溶出度按质量标准进行检查,测定毛冬青分散片中总黄酮和原儿茶醛的含量。结果一、毛冬青醇提物处方前研究毛冬青醇提物二项式回归吸湿方程为y=-0.0221t2+0.7328t+1.2694,吸湿加速度为-0.0442g·h-2,吸湿初速度为0.7328 g·h-1。毛冬青醇提物在16 h左右达到吸湿平衡,平衡吸湿率为7.34%,临界相对湿度为78.1%。PVPP、CMS-Na、交联羧甲基纤维素钠(CCMC-Na)、淀粉和糊精,显著增加了毛冬青醇提物的平衡吸湿量和吸湿加速度,其作用大小为:PVPP>CMS-Na>CCMC-Na>糊精>淀粉。磷酸氢钙、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁等均在不同程度上降低了毛冬青醇提物的吸湿加速度、平衡吸湿量和平衡吸湿时间,其作用大小为:磷酸氢钙>滑石粉>乳糖>硬脂酸镁>微粉硅胶>MCC。其中磷酸氢钙、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁能提高毛冬青分散片的临界相对湿度。采用HPLC法建立毛冬青醇提物中原儿茶醛的含量测定方法,色谱条件为:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-1%冰醋酸(15:85)为流动相;检测波长为312nm;流速:1.00ml·min-1;柱温:30℃。测得毛冬青醇提物中原儿茶醛含量为0.261 mg·g-1。毛冬青醇提物在高温、光照、高湿的环境下,原儿茶醛含量稳定。毛冬青醇提物与PVPP、CMS-Na、CCMC-Na的混合物在第10天的时候原儿茶醛的含量与第0天采用SPSS13.0比较,P<0.01,表明毛冬青醇提物与PVPP、CMS-Na、CCMC-Na在高温环境下不稳定。在高湿和光照条件下,毛冬青醇提物与辅料混合物性质稳定。二、毛冬青分散片制备工艺研究采用单因素筛选法,筛选出毛冬青分散片填充剂为磷酸氢钙和MCC,崩解剂为PVPP和CMS-Na,崩解联用比例为PVPP:CMS-Na为2:1,润湿剂为3%聚维酮(PVP)溶液,润滑剂为硬脂酸镁,用量为0.8%,矫味剂为三氯蔗糖,用量为0.2%。再采用RSM-CCD优化MCC、PVPP、CMS-Na的用量,优选结果为MCC用量18%,PVPP用量9%,CMS-Na用量5%。毛冬青分散片中间体颗粒的休止角为28.35°,堆密度为0.50·gm-1,临界相对湿度为72.5%。三、毛冬青分散片质量标准研究三批中试样品结果显示:毛冬青分散片TLC鉴别中,以毛冬青对照药材为对照鉴别,在相同位置显相同颜色斑点,阴性无干扰。毛冬青分散片分散均匀性合格,溶出度测定,以总黄酮计,毛冬青分散片体外溶出度30min达80%以上。UV测定毛冬青分散片中总黄酮含量限度为不得少于44mg/片。HPLC测定毛冬青分散片中原儿茶醛含量限度为不得少于34μg/片。四、毛冬青分散片稳定性试验毛冬青分散片在温度40℃±2℃,湿度75%±5%条件下3个月的稳定性试验结果:性状、鉴别、重量差异、分散均匀性均符合要求,三批中试产品在第三月时的溶出度平均值为88.0%,总黄酮含量平均值为52.67mg/片,原儿茶醛含量平均值为40.37μg/片,均符合毛冬青分散片的质量标准。结论一、毛冬青醇提物在16 h左右达到吸湿平衡,平衡吸湿率为7.34%,临界相对湿度为78.1%,表明毛冬青醇提物本身吸湿性不强。再与常见的药用辅料混合后,高效崩解剂如:PVPP、CMS-Na、CCMC-Na能显著增强毛冬青的吸湿性,其他一些多糖类的辅料如:淀粉、糊精也能增强毛冬青的吸湿性,但效果较弱。磷酸氢钙、MCC、滑石粉、乳糖、硬脂酸镁能显著降低毛冬青醇提物的平衡吸湿量及吸湿加速度,不同程度的提高了其临界相对湿度,在热力学与动力学方面都起到了改善作用,且用量越大效果也越好。原辅料吸湿性直接影响中药分散片的质量稳定性,原辅料吸湿性越强,对制备过程的环境要求越高,对分散片包装及保存条件要求也越高,增加了其生产成本。对原料药的吸湿性及辅料对其吸湿性的影响进行研究,优选能降低原料药吸湿性的辅料,可为中药分散片的制备过程中的防潮提供依据。二、采用HPLC对毛冬青醇提物及分散片中原儿茶醛进行含量测定,该方法流动相简单易配制,供试品制备简单,专属性、稳定性、重现性好。毛冬青醇提物本身在高温、光照、高湿的环境下性质稳定,高温条件下毛冬青醇提物与PVPP、CMS-Na、CCMC-Na混合后不稳定,其余条件下毛冬青醇提物与其他辅料相容性好,性质稳定。在中药分散片的制剂处方中,辅料所占比例较大,辅料与原料药之间发生各种反应大的概率也会增大,从而影响中药分散片的稳定性。对原辅料进行处方前研究,可以对辅料种类进行筛选,降低原料药与辅料发生的概率。三、筛选出毛冬青分散片处方为:药物(40%)、磷酸氢钙(27%)、MCC(18%)、PVPP(9%)、CMS-Na(5%)、硬脂酸镁(0.8%)、三氯蔗糖(0.2%)、3%PVP溶液适量,该处方分散均匀性好,崩解时限短。毛冬青分散片中间体颗粒的休止角为28.35°,堆密度为0.50 g·ml-1,临界相对湿度为72.5%,能满足工业化生产的要求。中药分散片中联用不同崩解剂效果较好,且崩解时限随着崩解剂的用量增加呈现先降低后增加的趋势。中药分散片硬度也是影响崩解的因素之一。四、毛冬青分散片中TLC鉴别专属性好,溶出度检查方法简单准确。UV、HPLC两种方法进行含量测定,综合有效部位及有效成分两个指标,利于毛冬青分散片的质量控制。中药分散片的质量多以崩解时限、分散均匀性为标准,对中药分散片溶出度的研究较少,而提高药物的溶出度是分散片的最大特点。因此,溶出度应作为中药分散片质量控制的标准之一。五、毛冬青分散片在采用铝塑薄膜的包装条件下,在温度40℃±2℃,湿度75%±5%条件下储存3个月,其性状、鉴别、重量差异、分散均匀性均、溶出度及含量测定均符合要求,表明毛冬青分散片稳定性好。中药分散片由于处方中加入大量的崩解剂,若与外界环境隔离效果不好,则会严重影响分散片的稳定性。中药分散片的包装应采用铝塑薄膜包装,并注意控制贮藏环境的湿度。