目的:采用RT-PCR、Western杂交等分子生物学技术,检测在Ca²⁺拮抗剂A23187诱导下,人肺癌细胞NCI-H460 GRP78的表达水平,并分析其表达在肺癌细胞对VP-16耐药中的作用。方法:将5×10⁴个细胞接种于100ml的培养瓶中培养24小时后,倒掉培养液,加入含有不同浓度A23187（0、1、2、4、6μM）的新鲜培养液再培养24小时。然后采用RT-PCR、Western杂交检测各组细胞中GRP78在核酸和蛋白水平的表达,同时向各组细胞中加入不同浓度的VP-16,利用细胞克隆形成法测定细胞在VP-16作用下的生存率。根据GRP78的表达水平与细胞的生存率,阐明GRP78在肺癌耐药中的作用。结果:A23187可以明显诱导人大细胞型肺癌细胞NCI-H460GRP78的表达,且其表达水平与A23187具有一定的浓度依赖性,但其变化在核酸和蛋白水平并非完全一致。当A23187浓度为1μM和2μM时,即分别开始对于GRP78核酸和蛋白出现诱导效应,4μM和6μM时达到最大效应（与对照组相比提高了4和2倍）,表明核酸比蛋白更容易被诱导。细胞克隆形成法测定显示:诱导组细胞（A23187浓度为2-4μM）对VP-16的IC₅₀值明显高于对照组,而且呈浓度依赖性,最大耐药指数为3.7（A23187浓z为6μM）。根据上述各组细胞的IC₅₀以及GRP78表达的变化趋势,可以推断:GRP78能够提高NCI-H460细胞对VP-16的耐药性,并且其耐药性与GRP78表达的程度有关。结论:本研究表明,Ca²⁺拮抗剂A23187能够诱导人大细胞型肺癌细胞NCI-H460GRP78的表达,且其表达水平与A23187具有一定的浓度依赖性,但其变化在核酸和蛋白水平并非完全一致,GRP78高表达的细胞对VP-16的IC₅₀值明显高于低表达的细胞,表明GRP78的表达与肺癌细胞对VP-16的耐药性有关,有针对性地抑制基因表达或抑制其功能可能成为肺癌治疗的新思路、新方法。