农业环境中广泛分布着曲霉属和青霉属等产毒真菌株,能够产生赭曲霉毒素A（OTA）。OTA是毒副作用最强、污染最为严重的真菌毒素之一,已被国际癌症研究机构（IARC）列为ⅡB类致癌物质。常见的OTA检测技术有仪器分析法和免疫分析法,其中侧向免疫层析分析法（LFA）作为典型的免疫分析技术之一,具有灵敏度高、简单、快捷、成本低、现场即时等优点,受到了广泛关注。本文开展OTA的新型、半定量、定量、增强型、高灵敏、同步LFA检测技术研究,并应用于农业环境中OTA污染检测。主要研究成果如下:1、OTA半定量-定量胶体金LFA法研究在金标抗体探针制备及试纸条组装基础上,建立的LFA法可用视觉直接判读实现OTA半定量检测,同时可以用读卡仪实现定量检测。LFA法对OTA的半定量检测限为0.5 ng/mL,定量检测限为0.1 ng/mL,并可实现0.1-10 ng/mL范围内OTA现场实时半定量-定量检测。该方法对OTB的交叉率为85.8%,对其它真菌毒素几乎没有交叉反应,方法添加回收率为97.0%-110.8%,标准偏差为4.9%-12.2%。10种真实样品检测结果显示,OTA阳性检出为1.7-101.3 ng/g,LC-MS/MS的OTA阳性检出为1.5-97.5 ng/g,两种方法的相关系数为0.9928。结果表明,开发的LFA法简单、快速、灵敏度高、特异性强、准确性高,可应用于农业环境中OTA的半定量-定量现场实时检测。2、基于生物素化DNA的OTA双纳米金增强型LFA法研究研究中建立的生物素化DNA双纳米金增强型LFA法,是首次提出将双纳米金颗粒和链霉亲和素-生物素联合放大策略应用于OTA检测,OTA半定量检测限为0.06 ng/mL（较普通LFA降低8倍）,定量检测限为0.03 ng/mL（降低3倍）,可实现0.03-1.2 ng/mL范围内的现场实时半定量-定量检测。该方法特异性好,添加回收率为87.4%-113.4%,标准偏差4.4%-11.6%,真实样品检测结果和仪器分析检测结果也显示出很高的相关性。结果表明,本研究开发的增强型LFA法试纸条通过简便可行的双纳米金颗粒和链霉亲和素-生物素联合放大策略,实现了OTA更高灵敏度的简单快速、高特异性、高准确度、半定量-定量检测,对于拓展试纸条的应用前景具有很好的参考价值。3、基于菌-金生长增强型的OTA和AFB1同步LFA法研究建立大肠杆菌为载体的金颗粒生长增强型LFA法,可用于农业环境样本中OTA和AFB1同时检测。这是首次提出以菌为载体富集金纳米颗粒并通过金生长同步检测OTA和AFB1。对OTA和AFB1的半定量检测限分别为0.03 ng/mL和0.03 ng/mL（较普通LFA分别降低16倍和18倍）,定量检测限分别为0.01 ng/mL和0.01 ng/mL（分别降低10倍和20倍）,能实现0.01-0.5 ng/mL的OTA和0.01-0.2ng/mL的AFB1现场实时同步半定量-定量检测。该方法特异性好,准确度高,与仪器方法检测真实样品结果相关性高。结果表明,该增强型试纸条采用纳米金颗粒在大肠杆菌表面富集生长以获得灵敏度的显著提高,且实现同步半定量-定量检测OTA和AFB1,对于其它多种真菌毒素同时污染的农业环境样本筛查具有重要指导意义和应用价值。