目的：研究黄芪甲苷对H₂O₂诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用，并进一步探讨其分子机制。方法：1.建立肾小球系膜细胞氧化应激损伤模型将培养的人肾小球系膜细胞（HMC）随机分为6组：正常对照组、H₂O₂(1×10⁵、2×10⁵、3×10⁵、4×10⁵、5×10⁵nmol L^-1)损伤组，H₂O₂刺激4h，MTT法检测细胞活力，测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。2.黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用将培养的人肾小球系膜细胞随机分组：①正常对照组；②H₂O₂模型组；③黄芪甲苷干预组：黄芪甲苷6.25、12.5、25、50、100nmol L^-1预处理24h；④阳性药对照组包括：分别加入抗氧化剂Tempol(1×10⁵nmol L^-1)和人参皂苷Rg1(3×104nmol L^-1)预先处理24h。各细胞组处理后，采用MTT法观察细胞活力；检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性、超氧化物岐化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量。3.黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤保护作用的机制将培养的人肾小球系膜细胞随机分组：①正常对照组；②H₂O₂模型组；③黄芪甲苷干预组：黄芪甲苷12.5、100nmol L^-1预处理24h；④阳性药对照组：抗氧化剂Tempol(1×10⁵nmol L^-1)预先处理24h。各细胞组处理后，采用Hoechst33258染色检测细胞凋亡；DHE荧光染色检测胞内活性氧的产生；流式细胞术检测细胞周期变化情况；Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A及磷酸化p38、T-p38的表达。结果：1.建立肾小球系膜细胞氧化应激损伤模型检测结果显示：1×10⁵、2×10⁵、3×10⁵、4×10⁵、5×10⁵nmol L^-1H₂O₂均能诱导肾小球系膜细胞发生氧化应激损伤，细胞存活率明显降低，细胞活力与H₂O₂浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势；细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性升高，且随着H₂O₂浓度的增加，培养液中LDH活性有升高的趋势。2.黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用黄芪甲苷及阳性药组均能够减轻H₂O₂(3×10⁵nmol·L^-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤。实验结果显示：与模型组比较，用药组细胞存活率及细胞活力明显升高，细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性下降、超氧化物岐化酶（SOD）活性升高，丙二醛（MDA）含量降低。3.黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤保护作用的机制结果显示：100nmol·L^-1黄芪甲苷能够显著减轻H₂O₂(3×10⁵nmol·L^-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤；抑制细胞凋亡，降低胞内ROS产量；调节细胞周期蛋白Cyclin D1表达、各细胞周期的百分比及细胞正常增值；降低磷酸化P38的表达等有关。结论：1. H₂O₂体外诱导肾小球系膜细胞氧化损伤模型的建立最佳条件：3×10⁵nmol L^-1H₂O₂作用4小时。2.黄芪甲苷可对抗H₂O₂诱导的细胞损伤，提高细胞活力，降低LDH的活性，增加SOD活性、降低脂质过氧化物MDA含量。3．黄芪甲苷对H₂O₂诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤保护作用的机制与降低细胞内ROS，上调细胞周期蛋白Cyclin D1的表达、抑制p38/MAPK信号通路，抑制细胞凋亡有关。