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本研究构建了能高效表达具有强效清除自由基功能的抗氧化多肽VECYGPNRPQF（VEC）的毕赤酵母真核表达菌株Pichia pastoris KM71H FZM2014 AOP,进行了菌株表达产物（AOP）的体外功能验证,并以大鼠为动物模型进一步在体内探讨了AOP在缓解氧化应激方面的应用。1)抗氧化多肽VEC毕赤酵母表达菌株的获得与菌株表达产物（AOP）体外活性检测利用毕赤酵母表达菌株进行多肽VEC的表达与体外活性分析。通过电穿孔法将线性化载体pPICZαA-VEC-Zeocinr转至P.pastoris KM71H中,经抗生素Zeocin与PCR产物序列测序获得毕赤酵母表达菌株(命名为Pichia pastoris KM71H FZM2014 AOP)。通过Tricine-SDS-PAGE法鉴定发酵得到的菌株表达产物AOP,并用ABTS法测定AOP的体外自由基清除能力。结果表明,P.pastoris KM71H FZM2014 AOP表达的多肽样品与预期的多肽VECYCPNRPQF有同等大小的分子量;AOP具有较强的ABTS自由基清除能力,并在发酵第五天时抗氧化能力达到最高。2)AOP缓解大鼠氧化应激的研究选取50只体重为246.72±1.47g的SD大鼠随机分为5个处理组,每组10个重复。氧化应激模型的建立:空白对照组（CON组）每天腹腔注射1ml生理盐水,其余4组每天腹腔注射1ml D-半乳糖（300mg/Kg BW）溶液。试验处理:CON组和氧化应激组（OS组）每天灌胃2ml生理盐水;乙氧基喹组（EQ组）每天灌胃2ml乙氧基喹溶液（1mM）;发酵对照组（KFS组）每天灌胃2ml P.pastoris KM71H发酵上清（发酵五天）;AOP组每天灌胃2ml AOP。试验期70天,每两天记录一次体重和采食量。试验结束后,采集动静脉混合血样及各组织样品进行生长性能、氧化还原状态、肠道健康以及氨基酸代谢等方面的分析。结果表明:（1）灌胃AOP提高了大鼠的平均日增重和平均日采食量,而EQ和KM71H对大鼠生长性能作用不大。（2）与OS组相比,EQ和KFS显著降低了LPS的含量,AOP显著降低了血清中MDA和LPS的含量（P<0.05）;除KFS上调了CuZnSOD的表达外,各组间肝脏中CuZnSOD、MnSOD、GPX2和CAT的表达水平没有显著变化（P>0.05）。（3）EQ对肠道促炎性因子的表达无明显影响;KFS促进了回肠IL-2、IL-6的表达;灌胃AOP显著下调了大鼠空肠中IL-1β、Claudin-3和Occludin的表达,而上调了回肠中Claudin-3和Occludin的表达（P<0.05）。（4）与OS组相比,EQ有缓解游离氨基酸含量降低的趋势但无明显差异;KFS明显降低了Ile的含量;除Tyr外,AOP组的游离氨基酸含量较OS组均显著降低了约20%（P<0.05）。添加EQ显著提高了肾脏（y+LAT1、xCT、LAT1、EAAT2）、肠道（CAT-1、xCT、LAT2）和肌肉（LAT1）中氨基酸转运载体的表达,降低了肝脏中EIF4G2的表达（P<0.05）;KFS主要降低了肠道中氨基酸转运载体的表达,提高了肾脏和肌肉中部分相关氨基酸转运载体的表达;添加AOP降低了肾脏和空肠中部分氨基酸转运载体的表达（P<0.05）,而明显上调了回肠中TAT1、LAT4、ASCT2、IMNO、rBAT、EAAT3、xCT和y+LAT1的相对表达量（P<0.05）。AOP显著提高了肝脏中ASCT2的表达而下调了EIF4E、4E-BP1、EIF4G2、mTOR的表达（P<0.05）;在肌肉中,AOP组的氨基酸转运载体（ASCT2、PAT1、SNAT2、CAT-1和LAT1）以及蛋白合成与降解基因（4E-BP1、EIF4G2、DDO、LOX）的相对表达量均得到了显著提高（P<0.05）。综上结果,AOP和EQ均能缓解D-半乳糖诱导的氧化应激,且AOP的抗氧化性能要强于EQ。综上,本试验成功构建了能高效表达抗氧化多肽VEC的毕赤酵母表达菌株P.pastoris KM71H FZM2014 AOP,通过体外试验和氧化应激大鼠体内试验,显示了此酵母菌株发酵获得的表达产物AOP具有高效的抗氧化能力。与合成抗氧化剂EQ相比,AOP在提高大鼠的生长性能与缓解氧化还原状态方面更具优势,并能够改善肠道健康与体内氨基酸代谢,有望作为一种天然、安全的抗氧化剂替代物应用于畜禽养殖业的实践生产中。