背景：EB病毒(Epstein—Barr virus，EBV)与霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)及多种非霍奇金淋巴瘤(non—Hodgkin lymphoma，NHL)有关。广州地区是EBV相关性恶性肿瘤——鼻咽癌的高发区，该地区鼻咽原发性淋巴瘤的发病情况及其与EBV感染的关系是一个值得探讨的课题。按照2008年WHO造血与淋巴组织肿瘤的分类标准，鼻咽原发性淋巴瘤的免疫表型构成特征如何，目前尚未见报道。 EBV在世界范围内广泛流行，而与EBV密切相关的结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤的发病却与鼻咽癌一样具有很强的地域及人种倾向。迄今为止，国内外学者对鼻咽癌EBV的序列变异已进行了较为广泛的研究，然而，有关结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤EBV序列变异的研究却不多。 目的: 1.按照2008年WHO造血与淋巴组织肿瘤的分类标准，对广州地区鼻咽原发性淋巴瘤的发病情况、临床特点及免疫表型进行回顾性分析研究； 2.探讨各种免疫表型与EBV感染的关系及患者血清抗EBV抗体水平的特点； 3.对鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤EBV LMP1基因及F片段的变异类型及其伴随的点突变进行初步的研究探讨，寻找其变异的特点。 方法: 1.回顾性分析2001年1月至2008年9月中山大学肿瘤防治中心病理科诊断的109例连续的鼻咽原发性淋巴瘤的临床资料； 2.收集所有病例的蜡块，切片作一系列免疫组织化学染色进行免疫表型分型； 3.运用EBV编码的小RNA(EBERs)原位杂交检测各种免疫表型EBV的感染情况： 4.分析鼻咽原发性淋巴瘤患者的血清EBV VCA—IgA和EA—IgA滴度特点； 5.从石蜡包埋组织中抽提DNA，采用聚合酶链反应(PCR)、巢式PCR及限制性内切酶酶切分析及核酸序列分析等方法研究鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤EBV LMP1基因及F片段的变异类型及其伴随的点突变。 结果: 1.鼻咽原发性淋巴瘤的发病情况及临床病理特征 1.1鼻咽原发性淋巴瘤占所有结外淋巴瘤的10.9％(109/1005)。男女比为2.03：1(73/36)，中位发病年龄为55岁(12-81岁)，其中弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)发病较结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤晚11年(中位发病年龄分别为61.5岁和50.5岁)(p<0.05)。 1.2鼻咽原发性淋巴瘤常见的症状包括：颈部肿块(62/109，56.9％)、鼻塞(41/109，37.6％)、耳鸣(23/109，21.1％)、涕血(21/109，19.3％)、头痛(12/109，11.0％)、听力下降(11/109，10.1％)。18.4％(20/109)患者伴有“B”症状，其中结外鼻型NK/T淋巴瘤患者(8/18，44.4％)较DLBCL患者(9/56，16.1％)常见(p<0.05)。 1.3 Ann Arbor分期Ⅰ/Ⅱ期患者占78.0％(85/109)，Ⅲ/Ⅳ期仅占22.0％(24/109)。首诊时肿物局限于鼻咽部和(或)其周围结构的病例仅占17.4％(19/109)，82.6％(90/109)病例伴有淋巴结和(或)远处结外器官的侵犯，其中以颈部淋巴结的侵犯最为常见(81/109)，而颅神经侵犯罕见(2/109)。34.3％(23/67)患者血清乳酸脱氢酶(Lactic acid dehydrogenase，LDH)高于正常水平(>245u/L)。国际预后指数(International Prognostic Index，IPI)明确的共65例，83.1％(54/65)病例具有0-2个危险因素，16.9％(11/65)具有3-5个危险因素。 1.4鼻咽原发性淋巴瘤的95.4％(104/109)为NHL，HL仅占4.6％(5/109)。B—NHL和T—NHL分别占NHL的75.0％(78/104)和25.0％(26/104)。78例B—NHL中，56例为DLBCL，占71.8％，其中包括1例老年人EB病毒阳性DLBCL和1例富于T细胞/组织细胞DLBCL；其余22例B—NHL分别为髓外浆细胞瘤(6例)、套细胞淋巴瘤(5例)、粘膜相关组织结外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)(3例)、小淋巴细胞淋巴瘤(3例)、滤泡性淋巴瘤(2例)、Burkitt淋巴瘤(2例)和ALK阳性的大B细胞淋巴瘤(1例)。26例T—NHL中，18例为结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤，占69.2％；其余8例T—NHL分别为非特殊型外周T细胞性淋巴瘤(6例)、ALK阳性的间变大细胞淋巴瘤(1例)和T淋巴母细胞性淋巴瘤(1例)。5例HL均为经典型HL，其中4例为混合细胞型HL，1例为淋巴细胞丰富型HL。 1.5鼻咽原发性DLBCL(非特殊型)又可分为CD5阳性DLBCL、生发中心B细胞样(GCB)和非生发中心B细胞样(non—GCB)三种亚型，分别占7.7％(4/52)、15.4％(8/52)和76.9％(40/52)。依据肿瘤细胞是否表达CD56，结外鼻型 NK/T细胞淋巴瘤分为 TIA-1+/EBERs+/CD56+和TIA-1+/EBERs+/CD56-两种亚型，分别占55.6％(10/18)和44.4％(8/18)。16例可检测的结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中，全部呈CD8阳性，其中5例同时伴有CD4的表达。6例(6/16，37.5％)结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤呈p53过表达(超过40％的肿瘤细胞表达p53)。EB病毒LMP1的表达率为50％(8/16)。 2.EBERs原位杂交及患者血清EB病毒VCA—IgA和EA—IgA检测结果 2.1鼻咽原发性NHL EBERs的阳性率为20.2％(21/104)，HL则为60％(3/5)。T—NHL EBERs的阳性率为69.2％(18/26)，而B—NHL仅为3.8％(3/78)。18例(100％)结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤均呈EBERs阳性，其余8例T—NHL均呈EBERs阴性。56例DLBCL中，仅2例2008年WHO单独列出的DLBCL(老年人EB病毒阳性DLBCL及富于T细胞/组织细胞DLBCL各1例)呈EBERs阳性，其余54例DLBCL(非特殊型)均呈EBERs阴性。6例髓外浆细胞瘤中，1例呈EBERs阳性，其余16例B—NHL，包括2例Burkitt淋巴瘤均呈EBERs阴性。 2.2鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤患者血清VCA—IgA(≥1：40)和EA—IgA(≥1：10)阳性率分别为50％(6/12)和25％(3/12)，几何平均滴度(Geometric mean titers，GMT). 3.鼻咽原发性淋巴瘤的预后及其影响因素 3.1可追访的65例鼻咽NHL患者随访时间4～92个月，平均随访时间为27个月。中位生存时间为45.7个月，2年和5年总生存率分别为60.0％和48.0％。 3.2 Kaplan—Meier生存分析显示：B—NHL的5年生存率(53.0％)高于T—NHL(33.0％)(P<0.05)。IPI0～2个危险因素组2年生存率(66.0％)高于3～5个危险因素组(36.0％)(p<0.05). 4.516例鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤中，9例可同时扩增出LMP1 C端、LMP1 N端和BamHI F片段，发现DNA序列变异的组合类型有3种，即del—LMP1(Gly335)/XhoI—loss/F(6/9，66.7％)、del—LMP1(Asp335)/ XhoI—loss/“f”(2/9，22.2％)、del—LMP1(Asp335)/wt—XhoI“f”(1/9，11.1％)。 结论: 1.广州地区鼻咽原发性淋巴瘤并不少见，占结外淋巴瘤的10.9％。首诊时病灶局限于鼻咽部的病例少见(占17.4％)，大部分病例(74.3％)同时伴有颈部淋巴结的累及。 2.鼻咽原发性淋巴瘤绝大部分为NHL，HL罕见。NHL以B—NHL为主，其中大部分为DLBCL；结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤则占T—NHL的大多数。 3.鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤均感染EB病毒，其他类型的NHL与EB病毒关系不大。 4.EB病毒阴性的鼻咽NHL患者血清EBV溶解期抗体水平可升高，可能与体内潜伏感染的EB病毒在机体免疫力下降时被再激活有关。 5.鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤EB病毒del—LMP1 aa335的点突变率及BamHI F片段BamHI“f”的变异率均低于文献报道的鼻咽癌。本研究结果显示，del—LMP1 aa335点突变的有无与BamHI F片段的变异类型存在关联性。 6.鼻咽结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤EB病毒LMP1基因和F片段序列变异的最常见组合类型是del—LMP1(Gly335)/XhoI—loss/F。该EB病毒变异型与结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤发病的关系值得进一步探讨。