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背景与目的:细胞骨架中微管是其重要的组成部分,微管在细胞有丝分裂中起至关重要的作用,因此微管蛋白的研究成为抗癌药物开发的重要靶点。卵巢癌标准治疗方案中基于铂类联合紫杉醇的化疗是一线化疗方案。然而,铂类及紫杉醇的耐药问题严重制约着卵巢癌患者的预后。最近研究报道,6-姜烯酚有诱导微管损伤,抑制微管聚合的作用。本实验旨在通过研究6-姜烯酚对顺铂诱导人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞凋亡,以及6-姜烯酚对微管蛋白的作用,以期对铂类联合6-姜烯酚治疗卵巢癌提供一个基础。方法:1、使用结晶紫法检测6-姜烯酚、紫杉醇、顺铂以及6-姜烯酚联合顺铂、紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞的生长抑制作用;2、用Annexin V-FITC/PI-流式细胞仪检测6-姜烯酚、紫杉醇、顺铂以及6-姜烯酚联合顺铂、紫杉醇联合顺铂处理后人卵巢癌SKOV-3和A2780细胞周期和凋亡率的变化;3、用免疫荧光染色技术显微分别观察6-姜烯酚和紫杉醇对A2780和SKOV-3细胞的有丝分裂事件包括细胞微管蛋白的形态及分布,并计算有丝分裂细胞的百分比。结果:1、6-姜烯酚、紫杉醇和顺铂抑制A2780和SKOV-3细胞的生长,呈药物浓度依赖关系。6-姜烯酚、紫杉醇和顺铂作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后的IC50分别为:15.277±0.380μmol/L和15.540±0.230μmol/L,0.018±0.001μmol/L和0.023±0.002μmol/L,6.983±0.538μmol/L和6.177±0.440μmol/L。6-姜烯酚(IC10)联合不同浓度顺铂、顺铂(IC10)联合不同浓度6-姜烯酚、紫杉醇(IC10)联合不同浓度顺铂和顺铂(IC10)联合不同浓度紫杉醇作用于A2780和SKOV-3细胞72小时后的IC50分别为:2.913±0.187μmol/L和1.954±0.136μmol/L,3.212±0.225μmol/L和3.352±0.258μmol/L,2.768±0.173μmol/L和2.388±0.203μmol/L,0.003±0.0001μmol/L和0.004±0.0001μmol/L。结果提示:6-姜烯酚联合顺铂与顺铂单药相比,计算出剂量增强因子DEFA2780=0.417和DEFSKOV-3=0.316,细胞生长抑制作用明显增加（P<0.05）,6-姜烯酚明显提高了顺铂对卵巢癌细胞的生长抑制作用;顺铂联合6-姜烯酚与6-姜烯酚单药相比,DEFA2780=0.210和DEFSKOV-3=0.216,细胞生长抑制作用明显增加（P<0.05）,顺铂明显提高了6-姜烯酚对卵巢癌细胞的生长抑制作用。6-姜烯酚联合顺铂和紫杉醇联合顺铂相比,细胞生长抑制作用无明显差别（P>0.05）。顺铂(IC10)联合不同浓度6-姜烯酚以及6-姜烯酚单药对A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用无明显差别（P>0.05）。6-姜烯酚(IC10)联合不同浓度顺铂和顺铂单药对SKOV-3细胞的生长抑制作用明显优于A2780细胞（P<0.05）。2、6-姜烯酚和紫杉醇均以药物浓度依赖方式将A2780和SKOV-3细胞阻滞在G2/M期;顺铂以药物浓度依赖方式将A2780和SKOV-3细胞阻滞在G1/S期。6-姜烯酚(IC10)联合顺铂(IC50)和紫杉醇(IC10)联合顺铂(IC50)均能将细胞周期阻滞在G1/S期,与顺铂单药比较G1/S期阻滞更明显（P<0.05）;顺铂(IC10)联合6-姜烯酚(IC50)和顺铂(IC10)联合紫杉醇(IC50),均能将细胞周期阻滞于G2/M期,分别与6-姜烯酚和紫杉醇单药比较G2/M期阻滞更明显（P<0.05）。6-姜烯酚、紫杉醇和顺铂与联合组分别作用A2780和SKOV-3细胞凋亡细胞逐渐增多呈时间依赖关系。结果提示:6-姜烯酚与紫杉醇对A2780细胞的促凋亡作用无明显差别（P>0.05）,6-姜烯酚对SKOV-3细胞的促凋亡作用明显优于紫杉醇（P<0.05）。6-姜烯酚(IC10)联合顺铂促凋亡作用明显优于顺铂单药组（P<0.05）,而与紫杉醇(IC10)联合顺铂相比促凋亡作用无明显变化（P>0.05）。3、6-姜烯酚和紫杉醇诱导卵巢癌细胞后有丝分裂细胞的百分比分别为A2780（32.79%和33.16%）和SKOV-3（32.65%和32.77%）,对照组有丝分裂细胞的百分比分别为A2780（5.27%）和SKOV-3（4.71%）。结果提示:6-姜烯酚和紫杉醇分别作用卵巢癌细胞后有丝分裂细胞的百分比与对照组相比有明显差别（P<0.05）。而6-姜烯酚和紫杉醇分别作用于卵巢癌细胞后有丝分裂细胞的百分比无明显差别（P>0.05）,且无细胞选择性。6-姜烯酚作用A2780、SKOV-3细胞后与对照组相比,微管绿色荧光亮度明显降低,微管发生破裂,胞质内呈现空洞状,在胞质中的微管不再具有典型的放射状分布的特征,并出现多核细胞。结论:1、6-姜烯酚对卵巢癌A2780和SKOV-3细胞均有一定的生长抑制作用;2、6-姜烯酚通过抑制微管的聚合协同地增加了顺铂对人卵巢癌A2780和SKOV-3细胞的生长抑制作用,使细胞周期阻滞在G2/M期,促进卵巢癌细胞的凋亡。3、对于MyD88阳性细胞SKOV-3引起的紫杉醇耐药和微管蛋白依赖性紫杉醇抵抗,6-姜烯酚对其具有前瞻性意义。