中草药价格低廉、副作用小、抗病毒谱广，还能增强机体免疫力，诸多优点使得中药抗病毒研究成为世界研究热点之一。杆状病毒作为模式相对简单的DNA病毒代表，它的研究对其他抗病毒研究有一定的借鉴意义，并且该病毒对哺乳动物安全，便于操作。本课题利用我国丰富的中药资源和杆状病毒，建立一种新的抗病毒药物筛选方法，利用Bac-to-Bac策略构建一个重组杆状病毒，里面插入荧光素酶报告基因，随着病毒的复制增殖，荧光素酶得以表达，如此一来，通过测定荧光素酶的表达情况就可以监测病毒的增殖情况，因而可以从病毒增殖的角度直接评判药物的抗病毒活性。　　 本研究成功构建了重组杆状病毒，通过PCR鉴定表明荧光素酶报告基因已成功插入病毒基因组。采用荧光定量PCR方法测定重组杆状病毒的滴度，该方法耗时较短、操作简单，可检测低到只有几个拷贝的病毒基因组，具有较高的灵敏度，重复测定的RSD均小于4％，具有良好的重复性。对重组杆状病毒和野生杆状病毒的增殖活力进行比较，发现二者无显著性差异，所以重组杆状病毒可用作后续抗病毒实验的病毒株。对新建立的体外抗病毒药物筛选方法的测定条件进行优化，确定病毒吸附时间为2 h、细胞铺板密度为104个/孔、病毒感染复数为1、病毒感染4天后进行荧光素酶活性检测最合适。采用MTT法对黄连素、姜黄素、虫草素、黄芩苷、大黄酸、青蒿素和苦参碱七种中药成分进行药物安全浓度的测定，确定其最大无毒浓度分别是1.56 mg/L、6.25 mg/L、5 mg/L、12.5 mg/L、3.125 mg/L、12.5 mg/L、100 mg/L。在安全浓度之下进行体外抗病毒实验，采用药物病毒相互作用一段时间后同时加入、先加药物后加病毒、先加病毒后加药物三种加药方式进行，分别研究药物对病毒的直接杀灭、抑制病毒的吸附注入、抑制病毒的复制三种作用。结果表明，七种中药成分均有抑制病毒复制的作用，但姜黄素抑制效果最好，最高可达54％，只有黄连素、姜黄素和青蒿素有直接杀灭病毒活性，但效果不佳，对病毒的抑制率大概在10％～30％，虫草素和苦参碱可以抑制病毒的吸附注入，但抑制效果仅有10％左右。