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目的:
建立基于沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)OmpA基因VS1-VS2序列的RFLP基因分型技术,提高CT感染的检出和基因分型率;研究广州地区男性CT性尿道炎的分子流行病学特征,并探讨CT基因分型与尿道炎炎症程度的关系。
方法:
采用巢式PCR扩增37例尿道炎标本和12个标准株OmpA基因的VS1-VS2序列,将提纯的VS1-VS2基因进行RFLP分析或DNA测序。收集92例经E12SA法确诊的男性CT性尿道炎患者,尿道拭子标本行RFLP分析,分析CT基因型与尿道炎炎症程度的关系。
结果:
1.对37例尿道炎标本和12个标准株进行巢式PCR扩增,结果均扩增出OmpAVS1-VS2基因,扩增片段长度为453~463 bp,覆盖了OmpA基因的2个高可变区。用Alu I酶切此片段,观察到12种基因型呈现特征性的分布。
2.应用:RFLP法对37例CT临床株进行基因分型,并将结果与DNA测序进行对比;除2例混合型感染与测序结果不符,二者的分型符合率为92.59%。
3.92例男性CT性尿道炎患者,尿道拭子RFLP法检测结果显示以基因型F、E、J和D多见,B群(B、D和E型)、中间群(F、G型)和C群(C、H、I、J和K型)各占38.04%、30.43%、31.52%。
4.在92例患者中,无炎症组26例(28.3%),其中以CTF型和E型为主,二者共占56.5%;有炎症组66例(71.7%),也以F型和E型为主;尿道炎症细胞的多少与CT基因型之间无显著关系(P>0.05)。
结论:
1.改良的CT OmpA基因RFLP分型技术具有简单、快速、结果可靠的优点,适合于进行大规模的流行病学研究。
2.广州地区男性CT性尿道炎以基因型F、E、J和D多见,尿道炎炎症程度与CT基因型之间无明显关系。