【摘 要】
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本项研究通过测量和分析白桦天然种群中的583株个体的纤维长度,选择其中100株个体,对这100株个体的基因组进行ISSR和RAPD扩增分析,通过分析扩增条带与对应纤维长度的相关性,
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本项研究通过测量和分析白桦天然种群中的583株个体的纤维长度,选择其中100株个体,对这100株个体的基因组进行ISSR和RAPD扩增分析,通过分析扩增条带与对应纤维长度的相关性,筛选出与白桦长纤维性状显著相关的SCAR标记。主要结果如下: 1、通过对白桦天然种群中583株白桦个体纤维长度的测量和统计分析,结果表明这583株白桦的纤维长度呈正态分布,符合数量基因控制性状表型分布特点;为加大分析时不同个体间基因组扩增差异,以纤维长度均值加减1倍标准差为依据,选择其中100株个体用于基因组差异分析研究。 2、在传统CTAB法提取植物基因组DNA的基础上,探索出一种更高效的DNA提取方法一多次STE—CTAB法。用此方法不仅能有效去除白桦等木本植物中的多糖、多酚和其它次生代谢物质,而且得到的基因组DNA质量完全满足PCR及其分子生物学实验所要求的标准。 3、在系统分析了影响ISSR体系的各种因素基础上,建立了白桦基因组ISSR反应体系及程序:ISSR—PCR,20μL体系:10×buffer 2μL,Mg2+(25 mmol/L)2 μL,dNTPs(10 mmol/L)0.4μL,引物(10 mmol/L)0.8μL,TaqDNA聚合酶1U,模板DNA45 ng 2μL。反应程序:94℃加热5 min,使模板DNA变性,然后进入下列循环:94℃变性30 s,51℃退火30 s,72℃延伸30 s,共计30个循环,循环结束后,72℃延伸7 min; 4、通过对100株白桦个体基因组扩增条带与其对应的纤维长度的相关分析,得到了10条与白桦纤维长度密切相关的扩增条带(0.01≤P≤0.05),其中6条ISSR片段和4条RAPD片段。回归系数为正,说明此片段的出现会增加分析个体的纤维长度;反之,则会降低个体纤维长度。 5、将与白桦纤维长度密切相关的10条特异性片段中的7条(ISSR-AW44123,ISSR-AW44116,ISSR-AW44117,ISSR-AW44133,ISSR-AW44137;RAPD-C27932,RAPD-C27925)转化成SCAR标记。 6、在东北林业大学试验林场内随机采集100个白桦枝条,选择其中20个纤维长度大于和小于纤维长度均值加减1倍标准差的个体各10株用于SCAR标记验证。其中SCAR—ISSR—AW44123转换成功率达到70%,SCAR—RAPD—C27932转换成功率达到80%,从而为白桦长纤维标记辅助育种奠定了基础。
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