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前言 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，近年来我国乳腺癌的发病率呈逐年上升的趋势，目前已位居女性恶性肿瘤发病率之首，严重危害广大女性的健康，雌激素信号转导通路在正常乳腺组织发育及乳腺癌变的过程中起着十分重要的作用，雌激素通过类固醇激素核受体超家族中的雌激素受体(estrogenreceptor，ER)发挥其功能，乳腺癌患者的雌激素水平作为内分泌治疗和判断预后的一个重要生物指标已被人们普遍证实和接受，研究表明乳腺癌雌激素受体alpha(ERα)启动子CpG岛甲基化是ERα蛋白的失表达的机制之一，而乳腺癌患者ERα基因的沉默表达往往是肿瘤向恶性转化的标志，参与甲基化过程的DNA甲基化转移酶(DNAmethyltransferase，Dnmt)是该反应的催化剂，也是DNA甲基化与组蛋白去乙酰化关联的重要纽带。肿瘤转移相关基因1（Metastasistumorantigen1，MTA1）是近年来新发现的一个与肿瘤浸润转移密切相关的基因，在多种恶性肿瘤中高表达，细胞实验表明MTA1是核小体重构及组蛋白脱乙酰基酶复合物(nucleosomeremodelingandhistonedeacetylase，NuRD)的一个亚单位，其通过对靶基因的去乙酰化作用，使一些癌细胞向更具有侵袭性表型转化，但目前关于ERα基因启动子甲基化与MTA1蛋白表达在乳腺癌发生发展中的关系尚不清楚，二者是否存在协同作用，目前尚未研究清楚。 目的 本研究拟通过免疫组化(IHC)方法研究散发性乳腺癌MTA1蛋白表达，并以同例癌旁正常乳腺组织为对照，分析散发性乳腺癌中MTA1蛋白表达及其与乳腺癌临床病理因素的相关性;甲基化特异性PCR(MSP)检测散发性乳腺癌中ERα基因启动子甲基化水平，并分析比较其与MTA1蛋白的相关性，进一步探讨ERα甲基化在中国女性散发性乳腺癌中的表达特征及调控机制;检测去甲基化对乳腺癌细胞系MTA1蛋白表达影响，用改变乳腺癌细胞系ERα启动子甲基化状态的方法，观察其对MTA1蛋白表达状态的影响，探讨二者的关系。 材料与方法 采用免疫组化法（immunohistochemistry，IHC）检测MTA1蛋白的表达，并以同病例癌旁正常组织作为对照，分析MTA1蛋白表达与散发性乳腺癌患者主要临床病理学特征之间的相关性;采用甲基化特异性PCR(methylation-specificpolymerasechainreaction，MSP)检测102例散发性乳腺癌（2005-2011，中国医科大学附属第一医院）组织中ERα基因启动子区四个CpG岛密集区域(ER1、ER3、ER4、ER5)甲基化水平，分析乳腺癌组织中MTA1蛋白表达与ERα甲基化相关性;用去甲基化药物5-Aza-dC处理ERα启动子甲基化不同状态的乳腺癌细胞系，检测去甲基化对乳腺癌细胞系ERα启动子1、3、4、5甲基化状态的影响，进一步用westem-blot和RT-PCR检测去甲基化对乳腺癌细胞系MTA1蛋白表达状态的影响。 结果 1、MTA1蛋白在中国女性散发性乳腺癌组织中表达及其与临床病理参数的相关性 相对同病例癌旁正常组织，MTA1在乳腺癌组织中蛋白表达显著升高，乳腺癌组织中MTA1表达率为29.4％(20/102)，癌旁乳腺正常组织中MTA1表达的阳性率为5.9％(6/102)，二者表达差异有统计学意义(p＜0.05);MTA1蛋白表达与患者年龄、绝经情况无明显相关性(p＞0.05)，其与乳腺肿瘤大小相关(p＜0.05)，其表达与乳腺癌TNM分期及淋巴结转移相关(p＜0.05)。 2、MSP检测女性散发性乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化及其与MTA1蛋白表达的相关性 女性散发性乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率为37.3％(38/102)，ERα启动子甲基化出现在30.6％(22/72)MTA1阴性表达乳腺癌组织中，明显低于MTA1阳性表达乳腺癌组织中的ERα启动子甲基化率(53.3％，16/30)(p＜0.05)，女性散发性乳腺癌中ERα启动子甲基化与MTA1阳性表达呈正相关。 3、检测5-Aza-dC去甲基化处理对于MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系ERα启动子甲基化、细胞侵袭能力的影响 MSP检测发现5-Aza-dC去甲基化处理逆转了MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系ERα启动子甲基化，Transwell侵袭实验表明较高转移能力的MDA-MB-435s，较低转移能力的MDA-MB-231的每高倍视野下穿膜细胞数依次减少，侵袭能力依次下降。 4、检测5-Aza-dC去甲基化处理对于MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系MTA1mRNA及MTA1蛋白的影响 RT-PCR结果发现MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系5-Aza-dC处理组MTA1mRNA表达低于未处理组(P＜0.05)，Westernblot结果发现MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞系5-Aza-dC处理组MTA1蛋白表达低于未处理组(P＜0.05)。 结论 本研究结果提示，相对同病例癌旁正常组织，MTA1蛋白在女性散发性乳腺癌组织中表达显著升高。乳腺癌组织中ERα基因启动子甲基化发生率为37.3％(38/102)。MTA1蛋白表达及ERα启动子甲基化均与乳腺肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移相关，乳腺癌组织中ERα启动子甲基化与MTA1阳性表达呈正相关。改变高转移能力MDA-MB-435s、低转移能力的MDA-MB-231乳腺癌细胞系ERα基因启动子甲基化状态，结果发现MTA1mRNA和蛋白表达均下降，且癌细胞的侵袭能力下降。我们的研究证实在女性散发性乳腺癌中ERα基因启动子甲基化与MTA1表达增加密切相关，在乳腺癌发展过程中可能存在重要作用，但二者之间互相调控的机制仍需进一步研究。