shRNA沉默Talin-1对人U251胶质瘤细胞生长的影响及机制探讨

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目的:观察RNA干扰沉默talin-1对体外培养的U251人脑胶质瘤细胞生长的影响,并探讨其作用机制,为胶质瘤的治疗提供新的思路和方法。  方法: talin-1特异性shRNA表达载体 shRNA-talin-1经LipofectamineTM2000介导转染U251人脑胶质瘤细胞;噻唑蓝(MTT)法检测sh-talin-1质粒转染对U251胶质瘤细胞增殖能力的影响;流式细胞术观察sh-talin-1质粒转染对U251胶质瘤细胞周期的影响;Transwell法检测shRNA-talin-1质粒转染对U251胶质瘤细胞迁移的影响;Western-blotting检测U251胶质瘤细胞FAK、ERK蛋白表达和磷酸化的变化。  结果:(1) talin-1特异性 shRNA表达载体 shRNA-Talin-1转染后胶质瘤细胞中talin-1表达降低。(2) MTT结果显示sh-talin-1组细胞增殖能力明显较无序对照组和正常组降低。(3)流式细胞术显示sh-Talin-1组细胞周期G0/G1期细胞所占比例较无序对照组和正常组明显增加,而 S期、G2期则明显减少。(4) Transwell法检测发现sh-talin-1组细胞穿膜率较无序对照组和正常组明显降低。(5) Western-blotting检测发现sh-talin-1组细胞FAK、ERK蛋白总量无明显变化而磷酸化水平显著降低  结论:shRNA沉默talin-1可以有效抑制U251人脑胶质瘤细胞的增殖和迁移,并将细胞周期阻滞在G0/G1期,其机制可能是影响了FAK、ERK的磷酸化。
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