论文部分内容阅读
不结球白菜(Brassica campestris ssp.chinensis Makino)是我国南方重要的叶菜类蔬菜,在蔬菜的周年供应中占有重要地位。然而不结球白菜生产中病毒病,霜霉病及软腐病等病害较严重,严重影响了其品质和产量,利用基因工程培育新品种是急需解决的问题。白菜类蔬菜是离体培养再生困难的一类作物,而基因工程等高科技育种技术都是建立在稳定可靠的高频率离体再生体系的基础上。探讨影响不结球白菜高频率再生体系的因素具有重要的理论和实践意义。本试验以暑绿、苏州青、亮白叶和矮抗五号为材料,筛选了较易再生的不结球白菜品种,并研究了基因型、外植体类型以及不同的激素配比对再生频率的影响,优化了不结球白菜再生体系;并利用根癌农杆菌介导的方法,通过研究Km的适宜筛选浓度及加入时间、不同的外植体类型、预培养时间和共培养时间对转化效率的影响,初步建立了不结球白菜抗病基因遗传转化体系,结果表明:1.不同品种中,暑绿的再生频率最高。不同外植体类型中,子叶-子叶柄再生频率最高。种子发芽培养基中添加TDZ使幼苗生长健壮,利于外植体分化,不定芽分化率均在60%以上,子叶-子叶柄在培养基MN+TDZ0.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+AgNO37.5 mg·L-1中再生频率最高,达到80%,表明TDZ在诱导器官的发生中有较强的持续效应。2.Km的适宜浓度为15mg/L,采用延期筛选的方法进行筛选,下胚轴较子叶-子叶柄有较高的转化效率,预培养和共培养时间均为2天,共培养结束后,经GUS瞬时表达检测为阳性,并获得了卡那霉素抗性的转基因植株,经PCR检测证明InRING基因已整合到不结球白菜核基因组中。