目的：白血病是造血系统的恶性肿瘤，是由于细胞内脱氧核糖核酸的变异形成的骨髓中造血组织的不正常工作造成的，目前的治疗手段主要是进行造血干细胞移植和化疗。造血干细胞移植是目前唯一可能治愈白血病的方法，但其受限条件颇多，多数患者无法进行造血干细胞的移植，需进行化疗治疗，但化疗容易出现耐药和复发。多药耐药(MDR)是化疗药物治疗肿瘤的主要障碍之一。人类多药耐药基因的产物膜蛋白P170糖蛋白过度表达，P170在细胞膜上形成通道借助ATP水解形成的能量，将进入胞内的药物泵出胞外，使细胞内药物浓度降低，产生多药耐药。DNA甲基化所产生的抑癌基因失活是恶性肿瘤发生、发展重要机制之一。现有多项研究表明甲基化修饰可以用药物逆转。地西他滨(5-aza-2deoxycytidine，DCA)是一种DNA甲基化转移酶抑制剂，通过抑制肿瘤细胞甲基化水平而发挥抗肿瘤活性，并且表现有剂量相关机制，高浓度有细胞毒性作用，低浓度时有去甲基化的作用。地西他滨最初被美国FDA批准应用于高危组MDS的治疗，目前国内外已经有研究报道，应用地西他滨和联合化疗治疗难治性髓系白血病，取得较好的临床效果，其中的机制值得进一步研究。本实验以白血病多药耐药细胞系为研究对象，观察地西他滨对多药耐药基因（MDR-1）的影响，比较地西他滨(DCA)联合阿霉素(ADR)或地西他滨序贯阿霉素（ADR）方案治疗对于白血病K562细胞株多药耐药的逆转作用,并探讨其疗效有无差别，以期了解地西他滨在白血病多药耐药机制中的作用，为探索更合理的联合化疗方案治疗白血病打下实验基础。方法：1首先选取K562耐药盐酸阿霉素细胞株（k562/ADR）为研究对象，用CCK8比色法分别检测单药地西他滨或阿霉素对k562/ADR细胞生长的抑制作用，并测出两药48h细胞增殖抑制50%的药物浓度（IC50）。2采用流式细胞检测术法测单药地西他滨或盐酸阿霉素作用后对k562/ADR细胞凋亡的作用；3RT-PCR方法检测DAC对K562/ADR细胞MDR-1基因的作用4实验中我们分为（1）空白对照组：不加入任何药物；（2）单ADR组：用9μg/mlADR单独处理细胞48h；（3）单药DCA组：以1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml DCA分别单独处理细胞48h；（4）实验组a1-a3（DCA+ADR同时联合组）:为ADR+DCA+K562／ADR组，设DCA：1μg/ml组、5μg/ml、10μg/ml组， ADR9μg/ml分别共同处理48小时，（5）实验组b1-b3组（DCA序贯ADR联合组）：为ADR+DCA+K562／ADR，设DCA:1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml DCA预处理细胞24h后再给予以ADR9μg/ml处理细胞共48h；用同样的方法检测地西他滨和盐酸阿霉素以不同方式联合对K562／ADR细胞的增殖抑制及凋亡作用。５RT-PCR检测DCA和ADR单药及两药以不同方式联合或序贯治疗后对于MDR-1基因表达的影响。６统计学处理。结果：1单药地西他滨或盐酸阿霉素作用于K562/ADR细胞可以抑制其增殖，呈时间和剂量的依赖性(Fig.1，Fig.2，Table1，Table2)。DCA在48小时的半数抑制浓度为35.9μg/ml; ADR在48小时的半数抑制浓度为12.8μg/ml。2FCM分别检测DAC和ADR单药对K562/ADR细胞的细胞凋亡的作用。流式细胞术检测结果显示，单药地西他滨或盐酸阿霉素作用于K562/ADR细胞，随作用时间延长和浓度升高,细胞凋亡率也升高(Fig.3，Fig.4，Table3，Table4)3单药地西他滨对MDR基因表达的影响RT-PCR结果显示单药地西他滨作用于K562/ADR细胞可以抑制MDR-基因的表达，并呈时间和剂量依赖性，1μg/ml的地西他滨作用于K562/ADR细胞6h~48h MDR-1基因的表达量分别为（0.71、0.69、0.60、0.53）；5μg/ml的地西他滨作用于K562/ADR细胞6h~48h MDR-1基因的表达量分别为（0.70、0.67、0.54、0.36）；10μg/ml的地西他滨作用于K562/ADR细胞6h~48h MDR-1基因的表达量分别为（0.70、0.66、0.41、0.27）(Table5)。4地西他滨与盐酸阿霉素以不同给药顺序联合对K562/ADR细胞生长抑制的影响。选用浓度为1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml的地西他滨和浓度为9μg/ml盐酸阿霉素以不同给药顺序联合作用于K562/ADR细胞48h，实验中我们分为（1）空白对照组：不加入任何药物（；2）单DCA组：以1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml DCA分别单独处理细胞48h（3）单药ADR组：9μg/ml ADR单独处理细胞48h；（4）实验组DCA+ADR同时联合组a1-a3:为ADR+DCA+K562／ADR组，设DCA：1μg/ml组、5μg/ml、10μg/ml组，ADR9μg/ml分别共同处理48小时，（5）实验组DCA序贯ADR联合组b1-b3组：为ADR+DCA+K562／ADR，设DCA:1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml预处理细胞24h后再给予以9ug/mlADR处理细胞共48h；各组的抑制率分别为（17.8±1.6）%、（30.7±1.4）%、（36.33±0.78）%、（13.4±1.25）%，（31.3±1.75）%、（47.53±1.80）%、（69.07±1.80）%、（45.53±1.20）%、（61.7±1.51）%、（80.73±2.12）%，可见两种联合用药方式对细胞生长抑制率均高于单药组，尤以DCA序贯ADR联合组对细胞生长的抑制率最高（table-6, Fig.5，Fig.6）。5流式细胞术检测结果显示：空白对照组、DCA组、ADR组、DCA+ADR同时联合组a1-a3、DCA序贯ADR联合组b1-b3组的凋亡率分别为（16.67±0.87）%、（22.67±1.55）%(32.73±2.40)%(12.17±1.64)%、（29.10±1.91）%、（44.20±1.85）%、（67.03±1.48）%、（43.37±1.49）%、（59.87±2.43）%、（78.83±1.30）%，联合用药组与单药组相比差异有统计学意义（P﹤0.05)（table-6，Fig.7）。两种联合用药组的细胞凋亡率均高于单药治疗组，尤以DCA序贯ADR联合组效果最明显。6RT-PCR结果显示，K562/ADR细胞中MDR-1基因的表达变化：RT-PCR结果表明：空白对照组、DCA组、ADR组、DCA+ADR同时联合组、DCA+ADR序贯联合组的MDR-1基因的表达水平分别为0.72±0.01、0.53±0.02、0.36±0.02、0.27±0.02、0.67±0.02、0.50±0.02、0.36±0.02、0.25±0.03、0.42±0.03、0.24±0.02、0.14±0.01。试验中两种联合给药方式的MDR-1的表达量均较单药组低，尤以（DCA+ADR序贯联合组）表达量最低有统计学意义（P﹤0.05)（table-8，Fig8.9）。结论：1单药地西他滨或盐酸阿霉素作用于K562/ADR细胞均可有效抑制其增殖并促进其凋亡，呈时间和剂量的依赖性；单药地西他滨或盐酸阿霉素作用于K562/ADR细胞48h的半数抑制浓度分别为35.9μg/ml和12.8μg/ml。2.DCA联合ADR能够逆转白血病K562／ADR耐药细胞株的多药耐药性。3．DCA序贯ADR可逆转白血病K562／ADR耐药细胞株的多药耐药性。4． DCA序贯ADR可逆转白血病K562／ADR耐药细胞株的多药耐药性较DCA联合ADR明显。