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茯苓多糖是从茯苓[poria cocos(Schw.) Wolf]中提取的,具有很强的抗肿瘤和免疫调节活性,能提高细胞介导的免疫活性的一种活性成分,但由于它的水溶性差,限制了其在临床上的应用。经过硫酸酯化修饰后得到的硫酸酯化茯苓多糖(Sulfation pachymaran, SP)和经羧甲基化得到的羧甲基茯苓多糖(Carboxymethytl pachymaram, CMP)易溶于水,具有抗肿瘤、抗病毒作用以及免疫调节的功能更加显著。而猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2, PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(postweaning mutisystenic wasting syndrome, PMWS)的主要病原。该病在世界各地广泛流行,PMWS患猪淋巴组织中淋巴滤泡内B细胞依赖区域以及滤泡旁T细胞依赖区域的淋巴细胞减少,从而导致免疫缺陷,使宿主长期处于免疫抑制状态。本研究的目的旨在探讨sP和CMP对PcV2引起仔猪免疫细胞产生免疫抑制的调节作用以及对PCV2感染小鼠免疫功能的调节及其机理,为sP和cMP在猪免疫抑制性疾病综合防治中的应用提供理论依据。1SP和CMP对PCV2感染仔猪脾细胞的增殖和分泌细胞因子的影响筛选猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRSV)/PCV2抗原和抗体均为阴性的断奶仔猪,无菌分离脾细胞进行体外培养。先加入1000TCID50PCV2病毒悬液孵育2h后,再加入终浓度分别为400μg/mL、200ng/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和12.5μg/mL的SP/CMP, MTT法测定猪脾T/B淋巴细胞体外增殖；ELISA方法检测脾细胞培养上清液中IL-1β、IL-2、IL-8、IL-10和TNF-α等细胞因子。结果显示,SP和CMP能协同ConA/LPS促进PCV2感染的猪脾T/B淋巴细胞体外增殖,提高PCV2感染的猪脾淋巴细胞的免疫应答能力。同时,sP和cMP能显著促进PcV2感染的猪脾细胞分泌IL-2,浓度为100μg/mL的CMP能下调PCV2感染仔猪脾细胞分泌IL-10。浓度为50～200μg/mL的SP能显著降低PCV2感染的猪脾细胞培养上清液中IL-1p水平,同时可刺激TNF-a的分泌。说明SP和CMP可以通过促进猪脾T/B淋巴细胞增殖活性以及调节细胞因子的分泌,增强细胞免疫应答,发挥免疫调节作用。2SP和CMP对PCV2感染的猪肺泡巨噬细胞吞噬功能和活性的影响筛选PRRSV/PCV2抗原和抗体均为阴性的断奶仔猪,通过支气管获取肺泡灌洗液并分离猪肺泡巨噬细胞进行体外培养。首先加入1000TCID50PCV2病毒悬液孵育2h,再加入终浓度分别为400μg/mL、200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL、25μg/mL和12.5μg/mL的SP/CMP,分别测定体外培养的猪肺泡巨噬细胞吞噬功能和培养上清液NO含量以及IL-1β、IL-8、IL-10、TNF-a和MCP-1等细胞因子。结果显示,SP和CMP能提高PCV2感染的猪肺泡巨噬细胞吞噬功能。SP在第4h、8h、24h时能下调PCV2感染肺泡巨噬细胞引起NO的过度分泌,CMP在第4h和8h时能下调PCV2感染的猪肺泡巨噬细胞过度分泌的NO水平。同时,SP和CMP能有效地下调PCV2感染的肺泡巨噬细胞过度分泌IL-8和IL-10,并对IL-1p分泌发挥调节作用。结果表明了SP和CMP通过激活猪肺泡巨噬细胞吞噬功能以及调节NO和细胞因子的分泌,提高PCV2感染的猪肺泡巨噬细胞的免疫功能。3SP和CMP对PCV2感染诱导猪脾细胞氧化应激的调节作用为了探讨SP和CMP对PCV2感染的猪脾细胞氧化应激的调节作用,从PRRSV/PCV2抗原和抗体均为阴性的断奶仔猪中无菌分离猪脾细胞进行体外培养。首先在培养的脾细胞中加入1000TCID50PCV2病毒悬液,孵育感染2h后加入终浓度分别为200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL.25μg/mL的SP/CMP,测定脾细胞内ROS水平以及细胞培养上清液超氧化物岐化酶(T-SOD)和总抗氧化能力(TAOC)。结果显示,SP和CMP能下调PCV2诱导免疫细胞产生过量的ROS；同时能提高感染PCV2的猪脾细胞T-SOD和TAOC活性。结果表明,SP和CMP能通过降低PCV2感染猪脾细胞内ROS,升高T-SOD和TAOC的活性来提高细胞的抗氧化应激能力,从而保护免疫细胞,发挥免疫调节作用。4CMP对PCV2感染小鼠免疫功能的调节为了研究CMP对PCV2感染小鼠的免疫调节作用,将体重为18-22g的100只昆明系小鼠随机分成5组(A-E组),A、B、C、D组在第1d、3d、5d、7d通过腹腔注射、滴鼻以及口服三种途径联合感染PCV2病毒悬液(1000TCID50),0.5mL/只,E组给予相同剂量生理盐水。在第8d,9d,10d,A、B、C组小鼠给予腹腔注射终浓度分别为200mg/kg.BW.100mg/kg.BW和50mg/kg.BW的CMP, D和E组给予相同剂量生理盐水。第11d剖杀各组小鼠,测定免疫器官指数、小鼠脾淋巴细胞的体外增殖活性、脾脏和胸腺组织T-SOD、TAOC和GSH含量；ELISA方法检测血清中IL-2、IL-10.IL-6和IFN-a含量；用荧光定量PCR方法检测脾脏和胸腺组织IL-2、IL-10mRNA表达量。结果显示,CMP能显著升高PCV2感染小鼠的脾脏和胸腺指数以及促进T或B淋巴细胞体外增殖,提高脾脏和胸腺组织的TSOD、T-AOC和GSH含量；上调PCV2感染小鼠血清IL-2、IL-6和IFN-a含量以及下调血清IL-10水平,并提高PCV2感染小鼠脾脏和胸腺组织IL-2mRNA表达水平。结果表明,CMP能通过提高PCV2感染小鼠免疫器官的抗氧化能力和免疫功能来调节PCV2引起的免疫抑制作用。