论文部分内容阅读
目的:通过构建结肠癌BABL/c-CT26荷瘤小鼠模型,观察华蟾素对结肠癌生长的影响;探讨小鼠Th1/Th2平衡在华蟾素抗结肠癌中的作用;阐明华蟾素调节Th1/Th2平衡移动的机制。方法:1.构建结肠癌BABL/c-CT26荷瘤小鼠模型,分为健康组（Healthy组）、荷瘤对照组（Control组）、给予5-Fu（5-Fu组）、给予华蟾素组（华蟾素组）以及给予5-Fu联合华蟾素组（5-Fu+华蟾素组）,观察各组结肠癌肿瘤生长的情况;同时测量肿瘤的重量、体积等常规指标。2.小鼠Th1/Th2平衡在华蟾素抗结肠癌中的作用:采用流式细胞术分析小鼠脾脏中Th1细胞、Th2细胞以及Th1/Th2细胞比例变化,观察华蟾素对Th1/Th2平衡的影响;采用ELISA检测华蟾素对Th1/Th2分泌抗肿瘤相关因子与非相关因子的影响。3.华蟾素调节Th1/Th2平衡移动的机制的研究:采用WesternBlot、免疫组化分析华蟾素对Th1/Th2发育中相关转录因子的作用,初步探究华蟾素调节Th1/Th2平衡移动的机制。结果:1.华蟾素对结肠癌BABL/c-CT26荷瘤小鼠模型的影响:与Control组相比,华蟾素治疗组、5-Fu治疗组、华蟾素与5-Fu联用组对肿瘤的生长均有明显的抑制作用（P＜0.05）,其中华蟾素与5-Fu联用组效果最明显。肝、肾HE染色中,5-Fu组肝肾损伤相比于其他组最显著。用药阶段,5-Fu组体重增长最缓慢。免疫组化显示华蟾素治疗组、5-Fu治疗组、华蟾素与5-Fu联用组均能抑制Ki-67蛋白的表达（P＜0.01）。2.小鼠Th1/Th2平衡在华蟾素抗结肠癌中的作用:流式细胞术显示,与Control组相比较,华蟾素组、华蟾素与5-Fu联用组均能提高Th1细胞的比例（P＜0.05）并且降低Th2细胞的比例（P＜0.05）,同时提高Th1/Th2的比率（P＜0.05）。但5-Fu组与Control组相比则没有统计学意义（P＞0.05）。ELISA检测各组小鼠血清显示,华蟾素组、华蟾素与5-Fu联用组均能上调Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的表达（P＜0.05）,5-Fu组与Control组相比则没有统计学意义（P＞0.05）;华蟾素组、华蟾素与5-Fu联用组均能下调Th2型细胞因子IL-4和IL-10的表达（P＜0.05）。5-Fu组与Control组相比则没有统计学意义（P＞0.05）。3.华蟾素调节Th1/Th2平衡移动的机制的影响:Western Blot显示,与Control组相比,华蟾素组、5-Fu组、华蟾素与5-Fu联用组均能提高上调p-STAT4的表达（P＜0.05）,下调p-STAT6的表达（P＜0.05）;华蟾素组、华蟾素与5-Fu联用组能上调T-bet的表达（P＜0.05）,下调GATA-3的表达（P＜0.05）。5-Fu组与Control组相比,T-bet、GATA-3蛋白的表达则没有统计学意义（P＞0.05）。免疫组化显示同样趋势。结论:1.华蟾素能抑制结肠癌小鼠移植瘤的生长,联合5-Fu具有增效作用。但单用5-Fu对肝肾损伤较大,体重增长最缓慢。2.5-Fu可以抑制结肠癌肿瘤的生长,但不能提高机体抗肿瘤免疫。华蟾素能够增加小鼠的抗肿瘤免疫,其机制可能与活化STAT4、STAT6,进而上调Th1/Th2比率有关。