拟南芥LecRK-ConA基因及CKB1基因功能的初步研究

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干旱、高温、低温和高盐等非生物胁迫及病虫害等各种生物胁迫会严重地影响植物的生长发育进而影响农作物的产量。蛋白激酶主要是通过激活不同的磷酸化途径从而介导外界信号的感知和传递,已知与植物蛋白激酶相关的功能有抗逆性、激素信号转导及生长发育调节等。凝集素类受体蛋白激酶(LecRK)和酪蛋白激酶(CK)是两种常见的在植物中具有重要生理生化功能的蛋白激酶。本文对拟南芥LecRLK家族中的LecRK-ConA基因和CK家族中的CKB1基因的生理功能进行了初步研究。利用三引物法鉴定获得LecRK-ConA基因的两个缺失突变体的纯合子。启动子顺式作用元件分析显示LecRK-ConA具有多个与干旱、光、GA等应答相关的元件。实时定量PCR结果表明:LecRK-ConA基因的表达具有器官差异性,且在萌发的种子中表达量最强;ABA处理抑制其表达。用NaCl和甘露醇处理缺失突变体lecrkk-cona和Col-0后,发现lecrk-cona的种子萌发率低于野生型。此外,突变体lecrk-cona相对野生型Col-0来说,具有早花现象。对酪蛋白激酶CKB1基因启动子区域进行了分析,发现启动子区域含有很多与光应答以及胁迫应答相关的顺式作用元件。使用“三引物”法对CKB1基因的两个突变体进行了筛选,获得了该基因的纯合子突变体。使用gateway方法成功构建过表达载体并获得过表达转基因植株。以野生型、缺失突变体以及过表达株系为材料,进行双向凝胶电泳蛋白质组学分析,在野生型和突变体中发现了一些差异蛋白,检索数据库发现这些差异蛋白质有与光合作用相关的,也有参与到胁迫应答信号转导过程中的。上述结果表明,LecRK-ConA和CKB1两个蛋白激酶基因在植物的生长发育过程中均扮演重要角色,该研究为进一步研究它们的生理功能及其应用提供了重要参考依据。
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