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本研究在前期培养BCG-pasteur、△BCG 3112、△BCG 3113三种菌株,测定其生长速度以及统一菌液浓度的基础上,通过优化脂质萃取方法萃取出三种菌株的非极性脂质,再用薄层色谱法分析三种菌株脂质成分,然后通过对比挑选BCG-pasteur和△BCG 3112菌株的非极性脂质制成佐剂。为研究非极性脂质佐剂对结核病疫苗的效价影响,用BCG、BCG+BCG非极性脂质和BCG+△BCG 3112非极性脂质分别免疫小鼠,用流式细胞术和ELISpot法检测各组小鼠产生IFN-γ的脾淋巴细胞个数,同时采用ELISA方法检测小鼠的Ig G和Ig M抗体浓度,最后用H37Rv菌攻毒免疫小鼠,4w后观察各组小鼠病理切片,以研究非极性脂质佐剂对结核病疫苗免疫的效果。薄层色谱法结果显示,三种菌株的非极性脂质成分可能包括为三酰甘油、甲硫酚二角酰亚胺、家族蛋白PAT、甘油二酯、游离脂肪酸、游离分枝菌酸、鞘糖脂、硫脂I类、硫脂III类、肉豆蔻酸甘油酯和海藻糖二霉菌酸酯。通过非极性脂质阴影相对值比较发现△BCG 3112菌株的三酰甘油含量显著高于BCG-pasteur(P<0.05),因此选用△BCG 3112菌株非极性脂质作为佐剂研究,同时对比BCG非极性脂质佐剂的作用效果。疫苗免疫小鼠后,通过流式细胞仪检测产生IFN-γCD4和CD8的T淋巴细胞数,结果显示,空白对照组、BCG组、BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG3112非极性脂质组之间的CD4、CD8和CD4/CD8比值没有显著性差异(P>0.05);通过PMA刺激,BCG组、BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组产生IFN-γ的CD8与CD4 T淋巴细胞数显著性高于空白对照组(P<0.05),BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组的CD8、CD4 T淋巴细胞数与BCG组比较没有显著性差异(P>0.05)。通过PPD刺激,BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组产生IFN-γ的CD8与CD4 T淋巴细胞数显著高于BCG组和空白对照组(P<0.05),而BCG组与空白对照组相比没有显著性差异(P﹥0.05)。ELISpot实验表明,与BCG组比较,BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG3112非极性脂质组的斑点数显著增加(P<0.05),BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组之间没有显著性差异,但BCG+△BCG 3112非极性脂质组产生IFN-γ的T淋巴细胞高于BCG+BCG非极性脂质组。结果提示,BCG和△BCG 3112菌株的非极性脂质都具有提高BCG疫苗免疫效果的作用,且△BCG 3112菌株非极性脂质的作用效果更好。血清Ig G抗体水平检测结果显示,与空白对照组比较,BCG组、BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组均显著增加(P<0.05)。另外,BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组小鼠Ig G抗体水平显著高于BCG组(P<0.05),但BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组之间的Ig G抗体浓度没有显著性差异。Ig M抗体水平检测结果显示,BCG组、BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组显著高于空白对照组(P<0.05);而BCG组、BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG 3112非极性脂质组三组之间的Ig M抗体水平没有显著性差异(P﹥0.05)。以上结果提示,BCG和△BCG 3112菌株的非极性脂质均能提高提高BCG疫苗抗体效价,进而提高动物的体液免疫功能,而△BCG 3112菌株非极性脂质的作用效果更好。小鼠病理切片结果显示,BCG组、BCG+BCG非极性脂质组和BCG+△BCG3112非极性脂质组与攻毒组比较,小鼠肺脏出血明显减少,组织内红细胞较少;BCG组和BCG+BCG非极性脂质组肺组织有大量淋巴细胞浸润,且肺泡间距和上皮样结节的病变未有改善;而BCG+△BCG 3112非极性脂质组肺组织内淋巴细胞浸润减少和肺泡间距缩小情况有所改善,另外肺内未见上皮样结节形成。结果提示,BCG+△BCG 3112非极性脂质组对攻毒小鼠肺的保护作用效果最好。