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鳞状上皮细胞癌(鳞癌,或称表皮样癌)是一种多发生于肺部、皮肤、肛门、颈、喉、鼻和膀胱等有复层鳞状上皮组织的恶性肿瘤,发病死亡率高,危害十分严重。目前认为,发展和应用有效的肿瘤标记物诊断试剂开展早期诊断和病情监测是预防和治疗肿瘤疾病的有效措施。鳞状上皮细胞癌抗原最早发现于子宫颈癌组织,包括两种同源分子SCCA1和SCCA2,二者具有92%的氨基酸同源性和高度相似的抗原表位特征。研究已显示,SCCAg是一种重要的肿瘤标记物,与多种器官的鳞状上皮细胞癌有较密切关系。血清SCCAg水平可用于有效辅助宫颈癌、头颈部癌、肺非小细胞肺癌、结直肠癌等多种鳞状上皮细胞癌的临床诊断、病情监测和预防判断。目前,临床上主流的SCCAg检测试剂主要为国外管式化学发光试剂,研制具有自主知识产权的SCCAg诊断方法对于降低医疗检测成本具有重要意义。为此,本研究开展了基于管式化学发光的血清SCCAg检测方法建立研究,探索建立基于大肠杆菌表达系统的高效可溶性表达重组SCCAg抗原的方法,筛选制备SCCAg特异性单克隆抗体,建立SCCAg管式化学发光检测方法并开展性能评价。本研究首先建立了一种简便、高效的基于大肠杆菌表达系统制备可溶性重组SCCAg抗原的方法。将SCCA1和SCCA2全长基因分别克隆入pGEX-6P-1载体构建获得重组表达质粒pGEX-SCCA1和pGEX-SCCA2,应用E.coli ER2566菌株进行抗原表达。结果显示,在不同诱导温度条件下重组SCCA1和SCCA2抗原均能够以可溶性形式存在于超声裂解上清中,表达量无显著差异。通过进一步优化IPTG溶度和诱导时间,本研究获得了较优的诱导可溶性表达SCCA1和SCCA2抗原的条件。进一步应用亲和层析纯化方法获得了具有较高纯度的SCCA1和SCCA2抗原。本研究应用目前临床上较主要使用的SCCAg检测试剂对比了获得重组抗原与人源SCCAg抗原的反应活性。结果显示,本研究获得的SCCA1抗原、SCCA2抗原与人源SCCAg抗原均具有性能基本相关的反应活性,可用于后续研究。本研究进一步开展了 SCCAg特异性单克隆抗体制备,并筛选可高效检测血清SCCAg的单克隆抗体检测配对。将纯化的重组SCCA1和SCCA2抗原免疫BALB/c小鼠,免疫后血清反应效价检测显示,本研究获得的重组SCCAg抗原具有良好的免疫原性。进一步开展了单克隆抗体制备,应用间接ELISA方法筛选获得80株同时对SCCAg抗原具有反应活性的单克隆抗体。通过配对实验、线性检测、检测灵敏度分析、小量血清相关性检测等多轮筛选获得单克隆抗体7F10与SAE标记的单克隆抗体4H8的性能较好的单克隆抗体配对。本研究即以之为基础建立了 SCCAg管式化学发光检测方法。本研究进一步对建立的SCCAg管式化学发光检测方法的性能进行了初步评价。结果显示,该检测方法对人源SCCAg抗原的检测灵敏度为0.15 ng/mL,达到现有临床主流SCCAg检测试剂水平。本研究同时应用该方法与现有临床上主要使用的对照试剂对100份确证阳性人血清标本进行了平行检测,结果显示,上述两种检测方法获得的检测结果具有良好的相关性(R2=0.9362)。上述结果说明,本研究建立的SCCAg检测方法性能较好,与对照主流试剂相当。综上所述,本研究建立了有效的基于大肠杆菌表达系统的可溶性表达和纯化SCCAg的方法,制备了具有较高纯度和活性的重组SCCAg抗原,筛选获得了可高效检测血清SCCAg的单克隆抗体检测配对,初步建立了具有相当性能的血清SCCAg管式化学发光检测方法,可为SCCAg的相关基础与应用研究提供重要支持。