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目的研究人乳头瘤病毒16型(HPV16) E6蛋白与Daxx相互作用对其DNA启动子序列的转录调控作用，分析Daxx对E6DNA复制的影响，为进一步探讨Daxx在HPV16E6致癌机制中的作用提供实验参考依据。方法(1)培养Caski细胞，经甲醛交联固定，超声破碎细胞，离心收集上清液，将上清液分4组：A组（实验组）加入兔抗HPV16E6IgG，B组（阳性对照组）加入Anti-RNApolymerase Ⅱ抗体，C组为Input，D组（阴性对照组）加入小鼠IgG。抗体孵育过夜后加入Protein G Agarose沉淀抗原抗体复合物，并用洗脱液清洗，收集上清液，65℃过夜解交联后回收DNA样品， PCR分析Daxx基因片段。(2)用Prime5.0软件分别设计Daxx基因启动子序列片段Daxx-1~-695nt、Daxx-1~-161nt与Daxx-161~-695nt引物，引入NcoI/HindⅢ酶切位点，以Daxx基因组为模板PCR扩增目的基因，分别用NcoI/HindⅢ双酶切PCR产物和PGL3-basic质粒，纯化回收酶切产物，用T4连接酶链接后，转化至E.coli，经双酶切鉴定及DNA序列分析，筛选阳性克隆，构建重组质粒pGL3-basic/Daxx-1~-695nt、Daxx-1~-161nt与Daxx-161~-695nt。(3)将质粒pGL3-basic、pGL3-basic/Daxx-1~-695n t、pGL3-basic/Daxx-1~-161nt、pGL3-basic/Daxx-161~-695nt分别单独转染，或与质粒pcDNA3.1(-)/HPV16E6共转染Hela细胞，24h和48h后，裂解细胞，收集上清液，加入荧光素酶试剂，荧光测定仪检测相对荧光强度。(4)分别将质粒pEGFP-c1和pEGFP-c1/Daxx瞬时转染Hela细胞，24h和48h后分别裂解细胞提取总RNA，以质粒pcDNA3.1(-)/HPV16E6作为内参标准品进行绝对荧光定量PCR反应，分析HPV16E6基因的拷贝数。结果(1)在HPV16E6抗体沉淀的染色质免疫复合物中，PCR扩增到Daxx基因片段。(2) Daxx启动子截断片段均正确地连入载体pGL3-basic，即成功构建了荧光素酶报告基因载体pGL3-basic/Daxx-1~-695nt、Daxx-1~-161nt和Daxx-161~-695nt。(3)质粒pGL3-basic/Daxx-1~-695nt、Daxx-1~-161nt和Daxx-161~-695nt能在Hela细胞激活Daxx-1~-695nt和Daxx-1~-161nt和Daxx-161~-695nt启动子活性，在共转染质粒pcDNA3.1(-)/E6的Hela细胞，下调Daxx-1~-695nt、和Daxx-1~-161nt和Daxx-161~-695nt启动子活性，且启动子Daxx-161~-695nt活性最低。(4)在pEGFP-c1与pEGFP-c1/Daxx转染的Hela细胞均有绿色荧光蛋白表达。GFP高表达时，HPV16E6基因的复制水平未出现显著变化；融合蛋白GFP-Daxx高表达时，HPV16E6基因的复制水平下调。结论(1) HPV16E6能结合Daxx DNA启动子-1~-161nt。(2)构建的质粒pGL3-basic/Daxx-1~-695nt、 pGL3-basic/Daxx-1~-161nt、pGL3-basic/Daxx-161~-695nt在Hela细胞中均具有表达活性，HPV16E6蛋白高表达抑制Daxx启动子的转录活性，且Daxx启动子-161~-695nt DNA片段可能是E6激活其转录的关键区域。(3) Daxx高表达能降低HPV16E6基因复制水平。