【摘 要】
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目的:评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征。方法:采用成品羟基磷灰石（hydroxyapatite,HAP）作为结合底物,通过X射线衍射（X-ray diffraction,XRD）对其进行物相鉴定,通过扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）对其进行表面形貌表征,通过傅立叶红外光谱（Fourier transform infra Red,
【基金项目】
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国家自然科学基金项目的资助（No.81873714,No.81700961）；
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目的:评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征。方法:采用成品羟基磷灰石（hydroxyapatite,HAP）作为结合底物,通过X射线衍射（X-ray diffraction,XRD）对其进行物相鉴定,通过扫描电子显微镜（Scanning electron microscope,SEM）对其进行表面形貌表征,通过傅立叶红外光谱（Fourier transform infra Red,FTIR）对其分子结构进行表征,通过纳米粒度电位仪对其进行Zeta电位测试,提取噬菌体DNA测序读取展示肽的序列,扩增制备目标序列的单克隆储液,以肽库中随机挑选的序列为阴性对照;滴度测试测定投入回收比和免疫荧光法验证目标序列的标靶亲和力,参照标准淘选方案,在不同p H值（7.5、6.5、5.5、4.5）及不同时间段缓冲洗脱液中分析目标序列的解吸附特征并初步探究其抗菌活性。结果:YSLHWGE（YSL）和VTDSKPK（VTD）的单克隆储液扩增后滴度均达到1011pfu/10μL,符合后续实验要求。测序结果得到目标序列和随机序列分别为YSL和VTD。通过重复3次滴度测试计算投入回收比发现,目标序列YSL与HAP的亲和度较高,投入回收比为随机肽VTD投入回收比的17.5倍。这种结合亲和力也通过免疫荧光实验得以验证,结果显示YSL组羟基磷灰石粉末被荧光点亮的面积比例和平均光密度分别为（71.98±2.31）%和（0.10090±0.00544）,均显著高于VTD组的（49.95±2.28）%（P＜0.01）和（0.04637±0.00117）（P＜0.01）;发现在不同p H值（7.5、6.5、5.5、4.5）环境中,YSL解吸附释放的噬菌体数量占原吸附总量的比例均高于随机肽VTD解吸附的比例（P＜0.01）。结论:羟基磷灰石结合肽序列YSLHWGE对结合底物羟基磷灰石有较好的亲和力且具有一定的随环境p H值变化的缓释能力。
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