【摘 要】
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目的:观察hnRNP A1在口腔鳞癌病灶中的表达情况,探索其对口腔鳞癌细胞生长的影响及具体作用机制。方法:1.收集人口腔鳞癌标本进行免疫组化染色,评估hnRNP A1在口腔鳞癌组织和正常口腔上皮组织中的分布和表达情况。2.应用RNA干扰技术抑制hnRNP A1基因的表达,构建hnRNP A1重组质粒增强其表达;通过细胞计数观察细胞的生长情况,并在RNA和蛋白水平验证基因的沉默和增强效果,通过res
【基金项目】
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青年基金项目的资助（No.81802710）；
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目的:观察hnRNP A1在口腔鳞癌病灶中的表达情况,探索其对口腔鳞癌细胞生长的影响及具体作用机制。方法:1.收集人口腔鳞癌标本进行免疫组化染色,评估hnRNP A1在口腔鳞癌组织和正常口腔上皮组织中的分布和表达情况。2.应用RNA干扰技术抑制hnRNP A1基因的表达,构建hnRNP A1重组质粒增强其表达;通过细胞计数观察细胞的生长情况,并在RNA和蛋白水平验证基因的沉默和增强效果,通过rescue模型验证si RNA有无脱靶效应。3.构建hnRNP A1过表达慢病毒载体和hnRNP A1沉默慢病毒载体,分别转导Cal27细胞系,通过细胞流式分析观察细胞在各个周期中的分布情况。4.结合同课题组前期研究的基因芯片结果选出G2/M期有关的差异基因CDK2,运用RNA干扰技术沉默hnRNP A1基因,在RNA和蛋白水平验证hnRNP A1与CDK2之间的相互关系。5.探索CDK2抑制剂Dinaciclib对口腔鳞癌细胞生长的影响和作用机制。结果:1.Hn RNPA1在口腔鳞癌组织中的表达相对于正常口腔上皮组织明显增强。2.口腔鳞癌来源的Cal27细胞系中,沉默hnRNP A1基因导致细胞生长的抑制,而hnRNP A1基因的过表达使细胞快速生长,这给hnRNP A1基因促进口腔鳞癌细胞生长的假设提供了依据。3.Cal27细胞系中导入sh RNA包装的慢病毒抑制hnRNP A1基因的表达导致细胞周期在G2/M期的停留,使细胞生长受到抑制。4.沉默hnRNP A1基因发现,CDK2的表达在RNA和蛋白水平上明显受到抑制。5.CDK2抑制剂Dinaciclib对口腔鳞癌细胞系Cal27和SCC25有明显的细胞毒性作用,在低浓度条件下足以阻滞细胞的生长,IC50分别为6.9 n M、14.4 n M;Dinaciclib浓度依赖性的抑制CDK2的表达。结论:Hn RNP A1在口腔鳞癌组织中的表达明显增强并且促进口腔鳞癌来源的Cal27细胞系的生长;hnRNP A1可能通过靶基因CDK2作用于与G2/M期,从而影响细胞周期的进程;CDK2抑制剂Dinaciclib可能通过抑制CDK2的表达而阻滞口腔鳞癌细胞的生长。
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