背景和目的:胰岛移植是治疗Ⅰ型糖尿病（Type I diabetes mellitus,T1DM）的重要途径,但却面临供体紧缺问题,以猪胰岛细胞为供体来源的异种胰岛移植是解决该问题的有效手段。猪胰岛细胞经肝门静脉移植给受体后,会诱发立即经血液介导的炎症反应（Instant blood-mediated inflammatory reaction,IBMIR）,导致移植后早期胰岛细胞大量丢失。补体激活是引起IBMIR的关键因素之一,人类衰变加速因子（Human decay acceleration factor,h DAF/hCD55）是一种补体调节蛋白,具有抑制补体激活的功能,以表达hCD55的猪胰岛细胞为供体,可能有利于减少IBMIR的发生。本研究在课题组前期制备的GGTA1基因敲除（GGTA1gene knockout,GTKO）、GTKO/hCD55巴马小型猪的基础上,探索hCD55在异种胰岛移植中抑制补体激活、减少IBMIR的效果。方法:1.使用改良Ricordi消化法分离GTKO、GTKO/hCD55猪胰岛细胞,通过双硫腙（Dithizone,DTZ）染色判断胰岛细胞纯度,二乙酸荧光素（Fluorescein diacetate,FDA）/碘化丙啶（Propidium iodide,PI）染色检测胰岛细胞活性。2.为鉴定分离的胰岛细胞功能,在体外使用（高/低）葡萄糖刺激胰岛细胞检测胰岛素分泌功能,在体内对T1DM重度联合免疫缺陷（Severe combined immune-deficiency,SCID）鼠进行异种猪胰岛移植实验检测其对T1DM SCID鼠的血糖纠正效果。3.为验证GTKO/hCD55猪胰岛细胞上hCD55的表达,利用聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）和反转录PCR（Reverse transcription PCR,RT-PCR）进行核酸水平鉴定,流式细胞术和组织免疫荧光进行蛋白水平鉴定。4.通过补体依赖的细胞毒实验（Complement dependent cytotoxicity test,CDC）和补体沉积检测,体外探究hCD55抑制补体激活、降低细胞毒性的效果。5.使用链脲佐菌素对恒河猴进行T1DM造模,经肝门静脉移植GTKO、GTKO/hCD55猪胰岛细胞,比较移植两种基因型胰岛细胞后在15 min、30 min和4 h的特异性猪C肽释放量,体内评估hCD55减少IBMIR的作用效果。结果:1.GTKO猪胰岛细胞DTZ染色显示纯度为83.00±6.71%,FDA/PI染色显示活性为86.25±2.50%,高糖刺激分泌的胰岛素含量为低糖刺激后的2.92±0.32倍,移植的5只T1DM SCID鼠中有4只血糖恢复正常。2.GTKO/hCD55猪胰岛细胞DTZ染色显示纯度为81.67±7.64%,FDA/PI染色显示活性为87.50±3.54%,高糖刺激分泌的胰岛素含量为低糖刺激后的2.01±0.13倍,移植的5只T1DM SCID鼠中有80%恢复正常血糖。3.RT-PCR结果表明GTKO/hCD55猪胰岛细胞表达hCD55 m RNA,流式细胞术和组织免疫荧光结果均显示GTKO/hCD55猪胰岛细胞有hCD55蛋白表达。4.CDC结果显示相比于GTKO猪胰岛细胞,GTKO/hCD55猪胰岛细胞显著减少细胞毒性（P＜0.05）。5.补体沉积检测结果表明相比于GTKO猪胰岛细胞,GTKO/hCD55猪胰岛细胞上人C3c补体、人C5b-9补体的沉积明显减少（P＜0.01、P＜0.0001）。6.在进行的2例猪-T1DM恒河猴异种胰岛移植实验中,相比于移植GTKO猪胰岛细胞,移植GTKO/hCD55猪胰岛细胞的受体在移植后15 min、30 min和4 h的特异性猪C肽释放量均减少。结论:GTKO/hCD55猪胰岛细胞上表达hCD55,hCD55有效发挥了抑制补体激活、减少人补体对猪胰岛细胞损伤的作用,具有缓解IBMIR发生的趋势,这对于临床（前）异种胰岛移植供体猪基因型的选择与功能评估具有一定意义。