论文部分内容阅读
目的分析血硒对重症急性一氧化碳中毒大鼠脑组织损伤产生的影响,探讨硒是否对重症急性重度一氧化碳中毒大鼠有辅助治疗作用。方法1.107只大鼠,体重450±20g,经Morris水迷宫训练淘汰2只,余随机抽出10只为空白对照组(BC组),剩95只采用纯品CO气体分次腹腔注射的方法建立大鼠急性CO-P模型,将造模后存活并恢复饮食活动者45只平均分为三组低剂量硒治疗组(LSe组)、高剂量硒治疗组(HSe组)、染毒组(CO-P组)。2.每三日一次Morris水迷宫实验测试,评估神经行为学改变,记录逃匿潜伏时间。3亚硒酸钠注射液:LSe组动物每日0.1μg/g/d肌注,HSe组动物0.2μg/g/d肌注。对照与染毒组各肌注相当量生理盐水。4每日采各组三份尾血0.5ml监测血清硒及全血谷胱甘肽-过氧化物酶活性的动态变化。5染毒后第21天取大鼠脑组织,观察脑组织结构及神经细胞形态采用苏木素-伊红(HE)染色;观察脑白质髓鞘结构及细胞形态采用Luxol氏坚牢蓝焦油紫(LFB)染色;神经细胞凋亡采用Tunnel末端转移酶法染色。6免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)※染色观察海马区髓鞘碱性蛋白1(myelinbasicprotein,MBP)的含量,阳性信号为棕黄色,在10×20高倍镜下每张切片选取海马区3个视野,阳性部位平均累计光密度值(Intergral optical density,IOD) image-pro plus6.0图像分析软件测定,取其均数作为统计分析数据。7.统计学方法:应用SPSS13.0软件进行统计分析;定量资料采用X S,各时间点各组之间的比较采用重复测量的方差分析;四组之间两两比较检验:方差齐:LSD,方差不齐:Dunnett’s T3及Kruskal-Wallis秩和。检验水准:α<0.05表示差异有统计学意义。结果1.大鼠急性重度CO-P模型建立:维持COHB浓度>65%16小时后,全部昏迷经灌饮灌饲48小时后大鼠49.5%存活,49.4%可恢复饮食活动。2.神经行为学评估:采用Morris水迷宫实验测试,重复测量的统计学方差分析,BC组潜伏逃匿时间逐渐缩短,CO-P组潜伏逃匿时间逐渐延长,LSe组、HSe组潜伏逃匿时间先缩短后延长,各组间大鼠潜伏逃匿时间差异均有统计学意义(P<0.001)。3.血硒动态变化结果:各组大鼠血硒水平的比较采用统计学两两比较,方差齐使用LSD检验,方差不齐则用Dunnett’s T3检验。两治疗组水平高于染毒组,低剂量硒治疗组第20天达到空白对照组水平,高剂量硒治疗组的15天达到空白对照组水平,各组间每日平均血硒水平差异均有统计学意义(P<0.001)。4GSH-PX活性变化监测结果各组大鼠GSH-PX活性的四组之间两两采用统计学比较,方差齐:LSD,方差不齐:Dunnett’s T3。空白对照组水平高于各组,两治疗组第4-8天接近空白对照组水平,大鼠GSH-PX活性水平在不同组之间/各时间点/随时间变化的趋势,差异均有统计学意义(P<0.001)。5. pearson相关性分析低硒治疗组酶活力(r=0.755,p<0.05)、高硒治疗组酶活力r=0.841,p<0.01)与血硒水平在中毒后补硒的前8日内呈现正相关关系。6. HE染色:染毒组大鼠脑组织重度水肿变性表现,两治疗组与染毒组镜下改变一致,损伤程度较轻。7. Luxol氏坚牢蓝焦油紫(LFB)染色可见中毒后大鼠脑白质脱髓鞘病变,LSe组与HSe组较轻。8. Tunnel末端转移酶法染色大鼠中毒后海马细胞凋亡,除海马区外,小脑部表现也较明显,两治疗组病变类似,程度较染毒组无明显区别。9免疫组化染色9.1镜下可见中毒大鼠海马区脑组织MBP阳性区域神经纤维分布缺失,神经细胞坏死、变性改变。镜下病理形态三组无明显差别;9.2经四组间IOD值方差不齐(F=10.271,P<0.001),经Kruskal-Wallis秩和检验,四组间的IOD值差别有统计学意义(H=21.753,P<0.001);两两比较低硒治疗组和高硒治疗组与空白对照组的IOD值有差异,与染毒组的IOD值的差别也有统计学意义,但其两组IOD值的差别无统计学意义。结论提高大鼠血硒水平,可增加谷胱甘肽过氧化物酶的活性,减轻重症急性一氧化碳中毒大鼠脑损伤。