视网膜母细胞瘤（retinoblastoma，RB）是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，严重危害患者的视力和生命，近年来化学治疗已逐渐成为治疗RB最重要的方法之一。目前应用于RB化疗的药物多存在副作用大、易导致耐药等缺点，寻找高效、低毒的化疗药物具有重要意义。榄香烯（elemene，化学名：1-甲基-1-乙烯基-2，4-二异丙基环已烷）是从中药温莪术挥发油中提取的油状物单体，属于不含氮的倍半烯烴类，为非细胞毒性的国家二类抗癌新药。研究证实榄香烯对体内外多种肿瘤具有较强的抑制和杀伤效应，但它的抗瘤机制尚未完全阐明。本实验采用榄香烯作用于视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞，探讨其抗癌机理，为临床应用榄香烯治疗RB提供理论和实验依据。第一章榄香烯抑制视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞生长的实验研究目的：观察榄香烯体外抑制视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞生长的作用。方法：应用台盼蓝拒染及MTT比色法观察榄香烯及足叶乙甙对视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞的生长抑制作用，通过统计分析确立榄香烯处理HXO-RB₄₄细胞的浓度。结果：榄香烯对视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞体外增殖有显著抑制作用，呈时间和剂量依赖性，榄香烯作用HXO-RB₄₄细胞24h、48h、72h的IC50值分别为127.75μg／mL、85.43μg／mL和52.95μg／mL：榄香烯和足叶乙甙联合用药其对HXO-RB₄₄细胞的抑制率大于单独应用榄香烯或足叶乙甙。结论：榄香烯可抑制视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞生长，榄香烯及和足叶乙甙联合用药可加强杀伤肿瘤细胞的作用。第二章榄香烯诱导视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄凋亡及对凋亡相关基因Survivin、NF-κB表达的影响目的：探讨榄香烯对视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞凋亡及对survivin、NF-κB基因表达的影响方法：体外培养人视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞，取对数生长期细胞分对照组和药物处理组，药物处理组榄香烯终浓度为40μg／mL、80μg／mL、120μg／mL，作用24h、48h、72h后收集细胞。应用流式细胞术观察榄香烯对HXO-RB₄₄细胞的凋亡及细胞周期的影响；应用免疫细胞化学方法和Western Blot法检测各实验组survivin、NF-κB p65蛋白表达；用RT-PCR方法检测各组细胞survivin mRNA的表达。结果：榄香烯诱导HXO-RB₄₄细胞凋亡，细胞凋亡率随着榄香烯作用时间和剂量的增加而增加；随着榄香烯作用时间延长，HXO-RB₄₄细胞出现G₂／M期的阻滞。survivin、NF-κB p65在HXO-RB₄₄细胞中均有表达；随着榄香烯作用时间延长，survivin、NF-κB p65表达下降。结论：人视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞株存在survivin、NF-κBp65的高表达，榄香烯可通过下调survivin、NF-κB p65基因的表达而诱导HXO-RB₄₄细胞凋亡。第三章榄香烯对视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞端粒酶、端粒酶逆转录酶活性的影响目的：探讨端粒酶和端粒酶逆转录酶在榄香烯抑制视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞生长、诱导其凋亡过程中的作用及其意义。方法：体外培养人视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞，分对照组和药物处理组，药物处理组榄香烯终浓度为80μg／mL，分别作用24h、48h、72h后收集细胞。应用MTT比色法观察榄香烯对视网膜母细胞瘤HXO-RB₄₄细胞的生长抑制作用；应用流式细胞术观察榄香烯对HXO-RB₄₄细胞的凋亡的影响；应用端粒重复扩增（TRAP）法检测各实验组细胞端粒酶活性，Western Blot法测定hTERT蛋白表达。结果：随着榄香烯作用时间延长，HXO-RB₄₄细胞生长抑制率和凋亡率增加。HXO-RB₄₄细胞中端粒酶活性和hTERT蛋白表达随着榄香烯作用时间延长而明显降低。结论：HXO-RB₄₄细胞株存在端粒酶活性的表达，榄香烯可通过下调hTERT蛋白表达，抑制端粒酶活性从而抑制HXO-RB₄₄细胞生长，诱导其凋亡。榄香烯有望成为抗视网膜母细胞瘤的新的化疗药物。