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【研究背景目的】肺癌在我国恶性肿瘤的发病率和致死率都是处于第一位,其中非小细胞肺癌约占肺癌总数的80%-85%。在前期工作中我们发现,中药臭椿皮的有效成分臭椿酮可以抑制非小细胞肺癌生长,但其作用分子机制不明。因此本课题主要是研究臭椿酮抑制非小细胞肺癌细胞生长的分子机制。【方法】通过免疫荧光检测臭椿酮对DNA损伤标记物γ-H2AX的表达情况;通过c DNA基因芯片检测臭椿酮对非小细胞肺癌差异基因及信号通路的改变;通过流式Brdu染色检测臭椿酮对DNA复制的影响;通过real time PCR检测DNA复制通路相关基因RPA1、PCNA、POLE2及LIG1 m RNA水平的改变;通过western blot检测RPA1及PCNA蛋白水平的改变;通过建立RPA1过表达细胞系验证臭椿酮抑瘤效应;通过建立多细胞系多模型体内检测臭椿酮的抑瘤效应。通过TCGA数据库分析RPA1在肺腺癌中的表达情况及生存期分析;通过real time PCR及western blot检测8对非小细胞肺癌组织及癌旁组织中RPA1 m RNA及蛋白水平的表达情况;通过建立RPA1敲除细胞系检测RPA1对非小细胞肺癌活性的影响。最后,通过MTT活性检测及A549皮下荷瘤小鼠模型在体内外对臭椿酮与临床一线化疗药物顺铂抑瘤效应进行比较。【结果】.1.臭椿酮诱导非小细胞肺癌H1299、H1975细胞发生DNA损伤,对A549细胞并无影响。2.经过基因芯片显示臭椿酮显著改变A549、H1299、H1975细胞基因共1222个,涉及21条信号通路。3.臭椿酮可以抑制非小细胞肺癌DNA复制。4.臭椿酮可以下调RPA1及PCNA m RNA和蛋白水平的表达且主要通过下调RPA1蛋白来抑制DNA复制。5.臭椿酮对RPA1过表达的非小细胞肺癌A549、H1299的抑制效应降低。6.臭椿酮抑制多种非小细胞肺癌模型瘤块生长。7.RPA1在非小细胞肺癌中高表达,其与肺腺癌患者不良预后密切相关。8.RPA1敲除的非小细胞肺癌活性受到显著抑制。9.臭椿酮MTT检测结果显示其抑制非小细胞肺癌效应高于顺铂,体内抑瘤实验结果显示顺铂与臭椿酮均可以抑制A549瘤块生长且臭椿酮抑瘤效应更佳。【结论】1.臭椿酮体外主要通过下调RPA1抑制DNA复制来抑制非小细胞肺癌生长。2.臭椿酮在多细胞系多模型的体内实验中均可以抑制小鼠瘤块生长且延长小鼠生存期。3.RPA1在非小细胞肺癌中高表达且RPA1敲除的细胞活性显著下降。4.臭椿酮在体内外抑制非小细胞肺癌生长效应均强于顺铂。