四逆散方源东汉张仲景所著《伤寒论》，由柴胡、白芍、枳实、甘草各等份组成，它们在方中分别起着君、臣、佐、使的作用。此方在临床上被广泛应用于炎症性疾病的治疗，其作用机理已部分阐明，但其活性成分及其药理活性尚未明确。目前，关于中药复方活性成分的研究思路仍然是分离有效部位或活性成分分别研究，无法阐明中药复方中各成分的作用和地位。因此，在本研究中，我们为了用新的思路和方法研究中药复方的药效物质基础，制备了复方四逆散成分特异性剔除的样品，进而研究成分特异性剔除对四逆散抑制迟发型变态反应的影响，探讨各成分在复方中的作用。 为了获得剔除芍药苷(Peaoniflorin)的四逆散样品供活性探讨使用，制备了抗芍药苷的免疫亲和色谱柱，用于特异性地剔除四逆散中的芍药苷。第一章首先合成了芍药苷的完全抗原—芍药苷与牛血清白蛋白的结合物Peaoniflorin-BSA，将Peaoniflorin-BSA对新西兰兔免疫获得抗血清，再将其纯化后与经CNBr活化的Sepharose 4B共价偶联制成免疫亲和色谱柱。将四逆散提取物样品溶液上样该色谱柱，洗脱，制得特异性剔除了芍药苷的四逆散样品。经检测Peaoniflorin-BSA被成功合成，将其用于免疫新西兰兔，获得的抗血清的效价经ELISA法测定达到1：20000，纯度达94％，交叉反应性低。其IgG与Sepharose 4B合成的IgG—Sepharose免疫亲和色谱柱中，IgG的偶联率为82％。用该免疫亲和色谱处理四逆散后，其中所含的芍药苷几乎完全被剔除，我们用定波长的UV—HPLC和DAD—HPLC检测剔除的效率并检验对于非芍药苷成分的影响。结果证明，利用抗芍药苷的免疫亲和色谱，能特异性剔除四逆散或其他样品中的芍药苷成分。 第二章为了制备针对柴胡皂苷a的免疫亲和柱，合成了Saikosaponin a—BSA并用HPL—C制备了纯化的抗原，对小鼠皮下及腹腔多点免疫。四次免疫后，腹腔注射人纤维肉瘤细胞(S180细胞)，10d后取腹水。获得了效价达到1：40000和1：20000，纯度达到92％的抗体蛋白。我们将纯化的多克隆抗体12 mg与CNBr活化的Sepharose 4B凝胶0.6 mg进行偶联反应制得的免疫亲和柱载样量达到120μg柴胡皂苷a。我们免疫亲和柱制备了剔除柴胡皂苷a的四逆散样品，经ELSD检测，柴胡皂苷a被94.5％的剔除了，同时柴胡皂苷d的含量也下降了34％，没有发现其他成分的变化。本方法较第一章中特异性地剔除芍药苷的方法具有所需样品用量少的特点，适用于成本高，较难获得的柴胡皂苷a样品。 在制备了特异性剔除柴芍药苷和特异性剔除柴胡皂苷a的样品后，将他们付诸于迟发型变态反应的药效学检测。药物对Con A体外诱导小鼠脾细胞增殖的影响的结果显示高浓度的四逆散、剔除了柴胡皂苷a的四逆散、芍药苷、柴胡皂苷a对Con A体外诱导小鼠脾细胞增殖有显著的抑制作用，而剔除了芍药苷的四逆散没有显著作用。这些结果显示剔除了芍药苷后四逆散在抑制DTH反应方面体内作用显著降低，体外作用消失。而柴胡皂苷a剔除后在抑制Con A体外诱导小鼠脾细胞增殖方面作用较四逆散全方低，但差异不显著。 第三章中我们还利用本实验室在先前研究四逆散、药对及单体成分在抑制ConA诱导的IL-2的释放的数据，利用统计建模的方法建立了一个中药复方“物质-药效”的模型，解释复方中个物质的作用，利用模型预见一些组分的作用，并得到实际实验的验证。 综上所述，利用免疫亲和柱能够制备特异性剔除复方四逆散中的单体成分的样品。成分特异性剔除的四逆散样品用于抑制迟发型变态反应的研究表明，单体的剔除会降低药效，但是又不会完全丧失药效，显示出中药复方整个平衡体系的稳态。