基于DABS-Cl柱前衍生RP-HPLC法对人血清和鼠肝组织中氨基酸的比较研究

来源 :华中师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:goodywq2008
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肺癌是具有最高发病率和致死率的恶性肿瘤之一,给国家和社会造成了巨大损失,给家庭带来了沉重的悲痛,一直以来,人们都没有停止过对肺癌疾病的研究。令人欣慰的是,随着现代科技的进步,医学手段越来越多样化,很多肺癌患者得到了有效的治疗。但不可否认的是,对于很多肺癌患者,因为肺癌发现的晚,或者没有科学地诊断出来,所以没有得到及时的治疗,失去了本可以治愈的机会。因此,早发现、早诊断和早治疗成为治疗肺癌的关键。我们知道,机体作为一个有机整体,时刻都在进行着新陈代谢,各种物质的代谢途径,种类以及数量都是动态平衡的。人们已经发现,机体正常与否和代谢物是否发生变化存在着密切的关系。因此,从代谢物的角度去研究肺癌的致病机理和诊断肺癌越来越受到重视。蛋白质是生命代谢的物质基础,氨基酸作为蛋白质基本组成单位,参与很多酶、激素等的合成,因此研究氨基酸的代谢具有重要意义。本文采用高效液相色谱技术,结合柱前衍生化,对人血清和鼠肝组织中的5种氨基酸进行了初步的研究。主要内容有:1.实验裸鼠饲养与组织样本制取。将对照组裸鼠和接种人肺癌细胞后的裸鼠在SPF条件饲养,裸鼠体表的肿瘤直径在5mm左右时,对裸鼠进行组织取材。2.有效完成了人血清和鼠肝组织样本的预处理。早晨空腹收集正常人、肺癌患者和肺癌化疗患者的全血,采用先离心再水浴凝固的方法去除纤维蛋白原以收集血清,有效防止溶血。利用超声波细胞粉碎机将鼠肝组织制成组织匀浆液,超声波粉碎条件是功率为200W,工作时间为4s,间歇时间为10s,超声频率为40次。3.准确建立了利用高效液相色谱法同时测定人血清和鼠肝组织样本中氨基酸的实验条件。通过优化色谱条件、衍生条件及其他氨基酸的干扰实验,最终建立了以乙腈-磷酸盐溶液pH7.0、柱温37℃、检测波长466nm为主要条件的测定方法,该方法准确,灵敏。4.初步进行了人血清和鼠肝组织的正常组与肺癌组的模式识别及氨基酸代谢的差异分析。通过载荷因子柱状图进行了氨基酸代谢的差异分析。采用偏最小二乘法对正常组和肺癌组进行模式识别,样本分类效果良好。
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