【摘 要】
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目的:该研究旨在采用生物信息学策略发现心脏差异表达基因,为揭示心脏发育、功能和发病机制提供新的侯选基因.材料和方法:将经过多轮的搜索、组装和延伸后得到的新颖cDNA用生
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目的:该研究旨在采用生物信息学策略发现心脏差异表达基因,为揭示心脏发育、功能和发病机制提供新的侯选基因.材料和方法:将经过多轮的搜索、组装和延伸后得到的新颖cDNA用生物软件在数据库中进行核酸和蛋白质分析.根据所有同源EST的组织来源,分析新颖cDNA代表的转录本的数字化表达谱,初步确定其差异表达特点.选择可能的差异表达转录本,设计引物从小鼠胚胎心脏扩增全部编码序列并克隆到pGEM-T easy vector后测序,验证组装序列的正确性.通过RT-PCR检测新基因在不同组织中的表达情况,确认其差异表达特点.将新cDNA的最大ORF克隆到pEGFP-C3并转染哺乳动物细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白表达,确定基因产物的亚细胞定位.结论:该研究从小鼠心脏克隆的三个新基因具有显著的差异表达特点.这三个基因的成功克隆表明生物信息学和实验方法相结合是克隆新的差异表达基因的有效途径.
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