论文部分内容阅读
N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶（N3-o-toluyl-fluorouracil,TFU）是N1-乙酰基、N3-邻甲苯甲酰基-氟脲嘧啶（ATFU,阿托氟啶）降解的次级化合物和5-氟脲嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）前体化合物。本研究观察了TFU在体内外的抗肿瘤作用,利用HPLC法对TFU及其代谢产物5-FU进行检测,确认了两者之间的代谢关系,解释了TFU的抗癌作用特点和规律。实验方法:体外实验部分:（1）以MTT法观察TFU对人肝癌细胞SMMC-7721和PLC/PRF/5细胞生长的抑制作用,并在肝微粒体酶存在条件下,检测了其提高TFU对人肝癌细胞生长抑制作用。（2）建立了细胞代谢上清液中同时检测TFU和5-FU的HPLC法,利用HPLC法对人肝癌细胞SMMC-7721的细胞代谢上清液中TFU和5-FU水平进行检测,并与5-FU对照组进行比较。体内实验部分:（1）以小鼠移植性肿瘤实验法,观察TFU对体内生长的肿瘤细胞抑制作用。（2）建立小鼠血清和肿瘤组织、肝和肺组织中TFU和5-FU水平的HPLC检测方法,利用HPLC法对小鼠上述组织和血浆中TFU和5-FU水平进行检测,得到其在血浆和组织中的分布特点,并与对照组小鼠血清和相应各组织中的药物分布进行比较。实验结果:体外实验:（1）在5.0μg·mL-1-200μg·mL-1剂量范围,TFU对人肝癌细胞SMMC-7721生长具有一定的抑制作用。但是,抑制作用较弱,当剂量增加至200μg·mL-1时,连续用药120 h,抑制率不超过55%。在肝微粒体酶存在条件下,TFU对人肝癌细胞增殖的抑制率提高,对SMMC-7721细胞抑制率提高27.8%～41.9%。（2）人肝癌细胞SMMC-7721培养上清液中5-FU和TFU在0.05—300μg·mL-1的范围内,均表现出良好的线性关系,方法回收率、精密度和重现性均满足生物样品分析的要求,5-FU和TFU在258nm处有最大吸收,在本方法的色谱条件下,基线波动小,5-FU和TFU的色谱峰峰形尖锐,分离良好,保留时间分别为2.5和.6.8min。空白血清色谱图中相应处无吸收峰出现,与杂质峰分离良好。对药物代谢水平检测结果显示,当未加肝微粒体酶时,样品中的TFU代谢非常缓慢,而加入肝微粒体酶时,检测各剂量组相应的孵育培养时问点细胞上清液中TFU浓度均明显下降;未加肝微粒体酶样品中5-FU释放非常较慢,加入肝微粒体酶后能够加速样品中5-FU的释放速度,释放出的5-FU浓度在各时间点均明显增大。体内实验:（1） TFU对小鼠肉瘤S180有明显的抑制生长作用。分别以50mg/kg,100mg/kg,200mg/kg灌胃给药10～14d,对S180肿瘤的抑制率分别为38.99%,51.83%和60.68%。但是,200mg/kg剂量组小鼠体重明显下降（p＜0.05）。（2）建立和测定血清及组织中TFU和5-Fu的标准曲线,在其浓度范围内线性关系良好,方法回收率、精密度和稳定性均能满足生物样品的测定要求,5-FU和TFU在258nm处有最大吸收,在本方法的色谱条件下,基线波动小,5-FU和TFU的色谱峰峰形尖锐,分离良好,保留时间分别为2.5和.6.8min。空白血清色谱图中相应处无吸收峰出现,与杂质峰分离良好。停止给药48h后,检测血浆和肿瘤组织、肝和肺组织中仍然有TFU的存在,但是,其浓度均在最小定量检测限以下;其主要代谢产物5-FU主要分布在肝组织和肿瘤组织中,其次是肺组织,在血浆中的浓度最低;单纯给予5-FU的对照组,停止给药后血清和上述各相应组织中均未检测到5-FU的存在。