湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫感染情况调查及弓形虫基因型研究

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弓形虫(Toxoplasma gondii)和犬新孢子虫(Neospora caninum)能感染猪,从而使猪的产仔率降低,故严重威胁人类和动物生命健康。为探明湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫的感染流行情况和明确弓形虫基因型,本研究采用间接血凝试验法(Indirect hemagglutination test,IHAT)和酶联免疫吸附试验法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对湖南省猪弓形虫病和犬新孢子虫病进行血清学检测,采用巢式PCR对湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫进行分子生物学检测,并通过限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism technology,PCR-RFLP)方法对湖南省猪弓形虫进行基因型鉴定。结果如下:(1)湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫的感染情况调查:本研究收集江西省2017年1月到2018年12月期间集约化猪场的猪血清样本共1500份,采用IHAT和ELISA方法检测猪血清,共检出弓形虫抗体和犬新孢子虫抗体阳性样本分别为87份和28份,总阳性率分别为5.8%(87/1500)和1.9%(28/1500)。其中,不同地区的猪血清弓形虫抗体和犬新孢子虫抗体阳性率分别为2.1%~7.7%和0.3%~4.6%,湘中地区的猪感染弓形虫的风险最高(OR=3.9,95%CI=1.5-10,P<0.01),湘南地区的猪感染犬新孢子虫的风险最高(OR=19.1,95%CI=2.4-148.7,P<0.01);不同季节的猪血清弓形虫抗体和犬新孢子虫抗体阳性率分别为1.9%~9.7%和0%~2.6%,冬季的猪感染弓形虫的风险最高(OR=5.5,95%CI=1.6-18,P<0.01);不同生产阶段的猪血清弓形虫抗体和犬新孢子虫抗体阳性率分别为2.3%~11.8%和0.6%~2.8%,母猪感染弓形虫的风险最高(OR=5.7,95%CI=2.8-11.7,P<0.01),母猪感染犬新孢子虫的风险也是最高(OR=4.7,95%CI=1.1-20.9,P<0.05)。(2)湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫的分子生物学检测:本研究收集湖南省2015年4月到2017年12月期间集约化猪场的猪脑组织样本共339份。猪脑组织DNA样本经弓形虫B1基因PCR检测后,共检出34份阳性DNA样本,阳性率约为10%(34/339)。猪脑组织DNA样本经犬新孢子虫NC-5编码基因和ITS-1序列PCR检测后,分别共检出5份和8份阳性DNA样本,阳性率分别为1.8%(5/339)和2.4%(8/339),NC-5编码基因和ITS-1序列测序结果均为犬新孢子虫目的片段序列。(3)湖南省猪弓形虫基因型研究:本研究在猪脑组织DNA样本的弓形虫B1基因检测结果基础上,通过12个基因位点(SAG1、5’-SAG2、3’-SAG2、SAG3、BTUB、GRA6、C22-8、C29-2、L358、PK1、SAG2和Apico)的PCR-RFLP方法对34份阳性样本进行基因型分型,结果显示,仅有2个样本成功扩增出所有位点,其中1个样本鉴定为Toxo DB#61,另1个样本鉴定为Toxo DB#10。总之,本研究通过湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫的血清学调查、分子生物学检测,结果显示湖南省的猪存在这两种寄生虫的感染,但感染率较低。通过弓形虫基因型鉴定,首次在猪中鉴定出基因型Toxo DB#61,表明该种基因型弓形虫也可感染猪。本研究不仅填补了湖南省猪弓形虫和犬新孢子虫相关研究的空白,也为弓形虫病和新孢子虫病的防控提供理论依据。
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