miR-155对卵巢癌SKOV3细胞株增殖和凋亡的影响

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目的:肿瘤严重威胁着人类的生命健康,卵巢癌是目前为止发现的女性生殖系统肿瘤最常见的恶性肿瘤之一[1],严重威胁着女性的健康和生命,然而由于卵巢癌发病隐匿,发现时多为晚期,同时由于没有特异的检测指标,为治疗及判断预后造成了难题。近几年来miRNA在肿瘤发生发展中的作用已成为研究热点,越来越多的研究表明miRNA与肿瘤的发生及发展过程密切相关,参与调控肿瘤细胞的凋亡、增殖、迁移等生物学行为,发挥着类似癌基因或抑癌基因的作用[2-4],本研究采用细胞培养、细胞转染、流式细胞学、实时荧光定量PCR、Western blot等方法检测miR-155和caspase3在卵巢癌SKOV3细胞株中的表达情况,探讨miR-155在卵巢癌细胞株SKOV3中的表达情况及其对caspase3表达水平的调节作用,为卵巢癌基因治疗提供理论基础,同时为卵巢癌的早期诊断和后续基因治疗提供新的视角。方法:1培养卵巢癌SKOV3细胞株。2实验分组:实验组即应用Hieff Trans脂质体转染试剂转染miR-155的过表达质粒;阴性对照组即应用Hieff Trans脂质体转染无miR-155的质粒;脂质体试剂对照组即转染Hieff Trans脂质体转染试剂组;空白对照组即不转染组。3应用MTT法检测各组卵巢癌SKOV3细胞增殖情况。4应用Annexin APC/7ADD双染法检测各组卵巢癌SKOV3细胞凋亡情况。5采用实时荧光定量PCR法检测各组卵巢癌SKOV3细胞中miR-155的表达情况。6 Western blot法检测各组卵巢癌SKOV3细胞中caspase3蛋白表达的情况。7用SPSS13.0统计软件对所有数据进行统计学分析。所有数据均以均数±标准差(x±s)方式表示,多组间均数比较采用方差分析、两组间均数比较用t检验,若方差不齐采用秩和检验,P<0.05为该数据由统计学意义。结果:1 MTT法检测各组细胞增殖情况:0、24、48小时,实验组与阴性对照组、空白对照组、脂质体对照组相比细胞增殖速度相似,统计学上无显著差异;72小时,实验组与其它三组相比细胞增殖速度明显减慢,统计学上有显著差异。2 Annexin APC/7ADD双染法检各组细胞凋亡情况:细胞转染72小时后,实验组与阴性对照组、脂质体对照组及空白对照组相比细胞早期凋亡率明显升高,统计学上有显著性差异(P<0.05);晚期凋亡率各组间无显著差异(P>0.05)。3实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-155表达情况:实验组miR-155的表达量与其它各对照组相比明显升高,统计学上有显著性差异(P<0.05)。4 Western blot法检测各组细胞caspase3蛋白表达情况:实验组与阴性对照组、空白对照组及脂质体对照组相比caspase3蛋白表达明显升高,统计学上有显著性差异(P<0.05)。结论:1 miR-155可抑制卵巢癌细胞增殖。2说明miR-155能促进卵巢癌细胞的凋亡。3在卵巢癌细胞中miR-155对caspase3有上调作用。4在卵巢癌SKOV3细胞株中有miR-155表达,一定程度上可抑制卵巢癌细胞的增殖,并通过上调caspase3促进卵巢癌细胞的凋亡,从而调控卵巢癌的发生发展。
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