木聚糖酶(Xylanase)是水解木聚糖的一类酶的统称,木聚糖酶的来源非常广泛,因来源不同酶活性及作用特点等也有所不同,本文所研究的木聚糖酶来自于玉米青储饲料,称为Xyn-E18。本实验利用大肠杆菌作为蛋白表达的菌株,首先通过诱导表达获得大量Xyn-E18的可溶性蛋白,使用Ni亲和柱和分子筛层析对该蛋白质进行分离纯化,最终获得高纯度和高浓度的目标蛋白,测定其相对分子量为38 kDa。由于蛋白水溶性很高,不易形成晶核,因此对蛋白进行甲基化实验,通过用甲基取代羟基的办法提高蛋白的疏水性,发现经甲基化修饰后蛋白有一定的结晶趋势。为了测定木聚糖酶Xyn-E18的活性以及酶学特征,用DNS显色法实验,经实验数据计算得出,Xyn-E18的酶活力可达1782 U,在pH 6.5时该酶的催化反应速率最高,在50℃左右该酶的反应催化效能较好,对于热稳定性而言,若将酶保存在低于50℃的环境下,则能保持较好活性;对于pH稳定性而言,若将酶保存在中性偏碱性的环境下,则能保持较好活性。二氢黄酮醇-4-还原酶(DFR)是生成花青素苷过程的重要酶,它能够以DHK、DHQ和DHM为底物,最终产生花青素苷,从而使植物形成颜色各异的花色。本文研究的瓜叶菊二氢黄酮醇-4-还原酶(DFR)来源于菊花中,属于膜蛋白,有一段疏水区域,实验中首先对诱导时间和IPTG浓度等诱导条件进行筛选从而获得可溶性蛋白,最终确定其诱导时间在10 h左右,IPTG浓度在0.2 mmol/L。使用Ni亲和柱和分子筛层析对该蛋白质进行分离纯化,纯化后的蛋白溶液纯度达90%以上,蛋白分子量约为38 kDa。使用HPLC法以DHM为底物对DFR蛋白的酶活性进行测定,初步测定了该酶具有体外活性。这两种蛋白都属于酶蛋白,在实验方法上采用了相似的方式。Xyn-E18是天然状态下的菌分泌的酶,通过体外重组实验将目标酶分离纯化出来,检测其在体外具有活性,从而可为饲料添加剂的开发利用提供帮助。瓜叶菊中DFR蛋白是一种具有底物特异性的酶,只对底物DHM产生酶活性,将这个酶在体外重组表达纯化,对其进行酶活性和结构特性研究,为其底物特异性的研究奠定基础。