三亚-陵水近岸海域甲藻调查及常见有毒种实时荧光定量PCR检测方法的建立

来源 :海南热带海洋学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leng159461
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
三亚-陵水海域属热带海洋性季风气候,温度适宜、光照和水资源充足,是发展热带农业、旅游业和热带海洋渔业的胜地;但同时产生的大量农业废水、生活污水及养殖废水排入近岸海域,造成局部海域水体富营养化严重,有毒甲藻极可能短时间内大量繁殖起来,威胁海洋生态系统、海洋环境以及公众健康,对有毒甲藻建立快速鉴定、检测方法在海洋环境监测中极其重要。三亚-陵水近岸海域甲藻调查共发现出5目14科21属67种甲藻,以原多甲藻目和膝沟藻目居多,所占比例达76.1%;共发现赤潮种27种,有毒种12种。对12种有毒甲藻的分布情况进行聚类分析,结果显示,三亚-陵水近岸海域常见有毒甲藻有塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)、利玛原甲藻(Prorocentrum lima)、米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)、环状异帽藻(Heterocapsa circularisquama)、剧毒卡尔藻(Karlodinium veneficum)和微小原甲藻(Prorocentrum minimum)。鉴于塔玛亚历山大藻分布广、毒性大、在较暖海域发生赤潮频率高,且三亚、陵水气候适宜、渔业发达;实时荧光定量PCR为甲藻的检测提供了可靠技术,本研究选择塔玛亚历山大藻为研究对象,建立其实时荧光定量PCR检测方法。使用f/2培养基,在温度23℃、盐度30±2‰、光暗比12:12、光照强度4000-6000lux条件下培养塔玛亚历山大藻,目前密度已达到4.3×10~5cells/m L。为设计塔玛亚历山大藻特异性引物,本研究从Genbank上获取塔玛亚历山大藻、小球藻、聚球藻、塔玛亚历山大藻同属藻类及一些常见甲藻的DNA序列,序列比对分析发现,塔玛亚历山大藻28S r DNA区域与其他浮游植物序列相似性较低,故以28S r DNA为特异性区间,应用Primer designer 6.0设计引物。正向引物(A.tamarense 28S-F):tgatagcacacaagtaccatgagg,基因位点:281-304;反向引物(A.tamarense 28S-R):caacactcccaccaagcaaa,基因位点:378-397。为验证A.tamarense 28S(F/R)的特异性,应用普通PCR法、SYBR Green实时荧光定量PCR法对浮游植物DNA样品进行扩增。结果显示,A.tamarense28S(F/R)只对含塔玛亚历山大藻DNA的样品产生扩增,结合SYBR Green实时荧光定量PCR熔解曲线均呈现单一峰值,可认定A.tamarense 28S(F/R)对塔玛亚历山大藻具有特异性。为建立水环境中塔玛亚历山大藻的检测方法,应用SYBR Green实时荧光定量PCR法对不同稀释倍数下的塔玛亚历山大藻DNA样品进行扩增,得到其定量计数标准曲线为y=-3.392x+42.412,理论上,样品中有6个塔玛亚历山大藻藻细胞即可被检测出。应用已建立的方法检测已计数的塔玛亚历山大藻样品,结果显示,检测细胞数为4.9×10~5cells/m L;镜检细胞数为4.3×10~5cells/m L,误差率(14.0%)小于海洋调查规范中浮游生物的允许误差范围(20%),表明该方法可靠。应用该方法检测三亚湾近岸海域塔玛亚历山大藻,检测细胞数为1000cells/L,镜检细胞数为850cells/L,误差率为17.6%(<20%),表明该方法特异性强、灵敏度高,具有一定的实际应用价值,可为塔玛亚历山大藻监测提供技术支撑。
其他文献
随着我国经济腾飞,社会进步,汽车工业的长足发展,2022年全国轮胎年产值将超10亿条。一方面废旧轮胎难以降解对自然环境乃至人类社会产生巨大的压力,另一方面废旧轮胎含有很高的热值,通过流化裂解技术解决固废污染的同时,可以得到裂解油、裂解气、炭黑等高价值产物。废旧轮胎流化裂解技术是一种将破碎的废旧轮胎颗粒流化后与高温气体直接接触进行热裂解的技术,利用该技术研制的流化裂解系统主要包括流化裂解炉、螺旋进料
学位
高精度角位移测量是精密测量技术的重要分支,广泛应用于国防军事、医疗卫生、航空航天等重要领域。随着科技的不断进步,市场对角位移传感器提出了新的要求,在实现高精度角度测量的同时,还需要实现绝对测量并且满足小型化需求。由于大多数绝对式编码器依靠多码道二进制编码方式实现绝对测量,难以满足市场对小型化和高精度绝对式传感器提出的双重挑战。因此,迫切需要探索一种新的编码方式,研制在实现高精度绝对测量的同时还能满
学位
胆囊癌早期发现困难,进展到晚期而预后不佳。尽管根治性手术治疗是目前治愈胆囊癌的主要方法,但临床仅有少部分病人可获得根治性治疗。化疗、放疗、靶向治疗以及免疫治疗可能提高部分胆囊癌病人生存,然而如何治愈胆囊癌,仍是临床难点。本文对胆囊癌手术治疗、化疗、放疗、靶向治疗、免疫治疗等近年国内外临床研究进行文献复习。
期刊
科技的高速发展对各行业转型带来了全新的机遇。接口技术作为科技时代的产物,在机电一体化控制系统中的应用逐步正规,重要性愈加凸显。接口技术可提升机电一体化控制系统性能,优化系统运算方法。对此,研究了接口技术在机电一体化控制系统中的实施措施,对接口技术在机电系统的操作提出有效的方案,并指出实施要点。本研究成果可为机电一体化系统正确使用与连接接口、确保技术的规范性有一定参考价值,有助于促进机电一体化控制系
期刊
近年来,我国资本市场逐渐成熟,吸引了大量发展前景好、极具市场竞争力的境外企业回到境内融资。这一过程中,换股吸收合并受到社会广泛关注,越来越多的企业倾向于在适当时机以换股吸收合并的方式登陆境内资本平台开展融资活动。境外公司采用换股吸收合并方式并购,主要以兼并目标公司股份为主,仅需付出少量现金就能实现在境内上市,避免了跨境合并过程中的诸多弊端。2019年1月中国外运以换股吸收合并方式整合了外运发展,成
学位
第一部分:补肾通蚀丸治疗肾虚血瘀型股骨头坏死的临床观察目的:观察补肾通蚀丸治疗肾虚血瘀型股骨头坏死的临床疗效方法:筛选广西中医药大学第一附属医院仙葫院区就诊的肾虚血瘀型ONFH患者分为两实验组、对照组。实验组患者予口服补肾通蚀丸,对照组患者予口服恒古骨伤愈合剂。并分别于治疗前、治疗第1个月、第3个月、第6个月,为时间节点,记录不同时间两组患者的VAS评分、Harris评分,并进行对比。结果:筛选入
学位
建筑工程概预算编制对工程造价的影响是一个复杂而又重要的问题。通过分析建筑工程概预算的定义、编制方法,探讨了建筑工程概预算编制对工程造价的影响因素及其作用机理。研究结果表明,建筑工程概预算编制的准确性和全面性对于工程造价的控制起到至关重要的作用,同时影响因素的多样性和相互作用也对工程造价的波动产生了重要影响。
期刊
诗学象似性是语言的一种美学特质。前人多将目光聚焦于文字文本中的语言象似性,缺少对多模态语篇中诗学象似性的认知研究。从多模态认知诗学理论的视角,剖析在儿童绘本中出现的诗学象似性有助于帮助儿童理解绘本内涵,同时还可以探讨绘本给儿童所带来的认知影响,对未来学者研究多模态语篇中诗学象似性背后存在的认知内涵有一定的研究意义。本论文以费里曼的诗学象似性模型为基础,整合系统功能语法和视角叙事理论构建了多模态认知
学位
教科书作为课程标准的展开和具体体现,在学校教育中具有举足轻重的作用。自2017年秋季学期伊始,统编版语文教科书在全国义务教育阶段学校的初始年级投入使用,至2019年实现了义务教育所有年级的“全覆盖”使用,这标志着全国义务教育阶段的语文教材版本自此进入了统一化的时代。新版本的语文教科书在教育理念和教学内容等方面都做出了更新和优化,这种变化也意味着给一线教师的教学带来了新的要求。教师良好的教科书使用能
学位
本文运用顾客金字塔模型以下简称"CPM"模型理论,选取行业毛利贡献额、卷烟品牌经营宽度、重点品牌上柜销量等核心指标对客户进行评级分类,通过对客户现状进行分析,采用"消费地图"、"零售户标签"、"消费画像"、"优选订单"等方式构建"盈利提升导航"营销新模式,创新推进烟草零售客户营销能力提升,从而实现客户营销管理精准化,推动行业高质量发展。
会议